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dsRNA ELISA 检测试剂盒

产品简介

BlueKit dsRNA ELISA 检测试剂盒采用双抗夹心法定量检测样本中双链 RNA(dsRNA) 含量,检测的 dsRNA 长度 60 bp 及以上 , 检测的 dsRNA 与其核酸序列无关。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!

产品型号:HG-DS001
更新时间:2025-04-08
访问量:109
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    dsRNA ELISA  检测试剂盒明书


HG-DS001

dsRNA ELISA 检测试剂盒

产品简介:

本试剂盒采用双抗体夹心法原理,并偶联生物i素-链霉亲和素系统,用于定量检测样本中双链RNA(dsRNA)含量,检测的dsRNA 长度60 bp 及以上, 检测的dsRNA 与其核酸序列无关。酶标板微孔中包被抗dsRNA 抗体,加入样本后孵育洗涤,再加入生物i素化检测抗体孵育,形成抗体-抗原-抗体复合物,再次洗涤后加入辣根过氧化物酶(HRP) 标记链霉亲和素(streptavidin,SA)。经过彻-底洗涤后加底物TMB显色,TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,经酸的终止作用转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中dsRNA 含量呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),根据标准曲线计算样品中dsRNA浓度。

(1)检测范围:
无-修饰、pUTP 修饰dsRNA 检测线性范围0.0156-0.5pg/μL
N1-Me-pUTP 修饰dsRNA 检测线性范围0.0312-1pg/μL
5-OMe-UTP 修饰dsRNA检测线性范围0.0625-1pg/μL
(2)检测限:
无-修饰、pUTP修饰、N1-Me-pUTP 修饰dsRNA 检测限 0.001pg/μL
5-OMe-UTP 修饰dsRNA 检测限0.01pg/μL
(3)定量限:
无-修饰、pUTP 修饰dsRN
A 定量限0.0156pg/μL
N1-Me-pUTP 修饰dsRNA 定量限0.0312pg/μL
5-OMe-UTP 修饰dsRNA 定量限0.0625pg/μL
(4)精密度:CV%≤10%
(5)回收率:80%~120%

规格:

96T

应用:

适用于定量检测样本中dsRNA 的含量。

试剂盒组成:


组分规格配制
包被酶标板(Coated Plate)8×12条即用型
生物i素化检测抗体(100×Detec Antibody)120μL×1管用稀释液作100倍稀释
HRP-链霉亲和素(100×Streptavidin-HRP)120μL×1管用稀释液作100倍稀释
稀释液(Diluent Buffer)30mL×1瓶即用型
显色液(TMB Substrate)12mL×1瓶即用型
终止液(Stop Solution)
6mL×1瓶
即用型
20×洗涤液(20×Wash Buffer)40mL×1瓶用纯水按1:19体积比稀释成洗涤工作液
无-修饰dsRNA标准品(No modificatiφn Standard,5ng/μL)15μL×1管用STE buffer稀释至所需浓度
PUTP修饰dsRNA标准品(pUTP modification Standard,5ng/μL)15μL×1管用STE buffer稀释至所需浓度
N1-Me-pUTP修饰dsRNA标准品(N1-Me-pUTP modification Standard,5ng/μL)15μL×1管用STE buffer稀释至所需浓度
5-OMe-UTP修饰dsRNA标准品(5-0Me-UTP modification Standard,5ng/μL)15μL×1管用STE buffer稀释至所需浓度
STE缓冲液(STE buffer)50mL×1瓶即用型
封板膜(Sealer Film)5张即用型
说明书1份即用型


备 注:未开封试剂盒,在2~8℃条件下有效期为12个月。




需自行准备的材料

◆酶标仪

◆去离子水

◆微孔板恒温振荡器

◆全新滤纸

◆微量移液器及吸头

◆涡旋振荡器


实验前准备

1.将本次实验所用试剂平衡至室温(18~25°C)。

2.20×浓缩洗涤液用纯化水按1:19 体积比稀释成洗涤工作液。

3.将抗体管、HRP-SA 管和标准品管1000 rpm在使用前离心30s,以避免管壁及管盖上残留试剂。

4.将100×生物i素化检测抗体和100×HRP-链霉亲和素在使用前用稀释液作100 倍稀释后使用。

5. 无-修饰、pUTP 修饰dsRNA 标准品用STE buffer稀释至1 、0.5 、0.25 、0.125 、0.0625 、0.0312 、0.0156、0 pg/μL。
N1-Me-pUTP 修饰dsRNA 标准品用STE
buffer 稀释至2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0312、0 pg/μL。
5-OMe-UTP 修饰dsRNA 标准品用STE buffer 稀释至4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0 pg/μL

标准品稀释方法建议如下:

a).无-修饰、 pUTP 修饰


编号终浓度
(pg/μL)
稀释方法
STE buffer工作标准品

100 49μLlμL5ng/μL标准品
A495μL5μL100 pg/μL溶液
B0.5 250μL250μLA溶液
C0.25 250μL250μLB溶液
D0.125 250μL250μL C溶液
E0.0625 250μL250μLD溶液
F0.0312 250μL250μLE溶液
G0.0156 250μL250μLF溶液
H250μL/
b).N1-Me-pUTP 修饰
编号终浓度
(pg/μL)
稀释方法
STE buffer工作标准品

100 49μL1μL 5ng/μL标准品
A2495μL10μL 100 pg/μL溶液
B1
250μL250μLA溶液
C0.5 250μL250μLB溶液
D0.25 250μL250μL C溶液
E0.125250μL250μLD溶液
F0.0625250μL250μLE溶液
G0.0312250μL250μLF溶液
H250μL/
c).5-OMe-UTP 修饰
编号终浓度
(pg/μL)
稀释方法
STE buffer工作标准品

100 49 μL1μL 5ng/μL标准品
A4480 μL20μL 100 pg/μL溶液
B2250 μL250μL A溶液
C1250 μL250μL B溶液
D0.5250 μL250μL  C溶液
E0.25250 μL250μL D溶液
F0.125250 μL250μL E溶液
G0.0625250 μL250μL F溶液
H250 μL/







操作步骤

(1)从室温(18-25℃)平衡后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条加盖封板膜后用自封袋密封放回2~8℃。
(2)设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加入不同浓度的标准品100μL,样本孔中加入待测样本100μL。
 *当不能够确定待测样品中的dsRNA含量时,应当用STE buffer 做多个稀释倍数做检测,以免含量过高不能够读取有效数值。
(3)用封板膜封住反应孔,室温(18-25℃)下振板(500rpm)反应60min。
(4)弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(250μL),静置30s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次。
(5)标准品孔和样本孔中每孔加入工作浓度的生物i素化检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,室温(18-25℃)下振板(500rpm)反应60min。
(6)弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(250μL),静置30s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4 次。
(7)标准品孔和样本孔中每孔加入工作浓度的HRP-链霉亲和素100μL,用封板膜封住反应孔,室温(18-25℃)下振板(500rpm)反应30min。
(8)弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(250μL),静置30s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板4次。
(9)每孔加入单组分底物显色液100μL,用封板膜封住反应孔,室温(18-25℃)静置避光反应30min。
(10)每孔加入终止液50μL,立即进行检测,设定酶标仪波长于450nm处( 建议用双波长450nm/650nm)。

结果处理

1.标准曲线

dsRNA ELISA 检测试剂盒

2.实验检测结果



抗原浓度
(pg/μL)
N1 - Me - pUT P修饰标准品
OD(1)OD(2)平均值
2.8412 2.7362 2.7887 
1.8725 1.9135 1.8930 
0.5 1.0863 1.1207 1.1035 
0.25 0.623 0.6055 0.6143 
0.125 0.3388 0.3292 0.3340 
0.0625 0.1947 0.1885 0.1916 
0.0312 0.1192 0.1247 0.1220 
0.0567 0.0518 0.0543 


注意事项

1.显色温度和时间对实验结果至关重要,应准确把握。
2.洗涤过程中应使洗涤液浸泡反应板30s后再甩干,以充分洗涤非特异性吸附的成分。
3.所有试剂使用前应充分摇匀,加样时应将所加样物加入酶标板孔中底部,避免加在孔壁上部,加样时注意不可溅出,不可产生气泡。
4.若发现浓缩洗涤液中有结晶,可在37℃水浴锅中孵育,待结晶完-全溶解后再混匀稀释至工作浓度。
5.样本中应避免引入叠氮-化钠(NaN3),叠氮-化钠会破坏辣根过氧化酶活性,使检测值偏低。
6.实验操作过程中要严格避免RNase污染。
7.不可使用摇床代替振板机,若无振板机可采用室温(18-25℃)静置孵育,但静置孵育会造成检测灵敏度下降一倍左右。建议无-修饰、pUTP修饰标准品从2pg/μL开始稀释,N1-Me-pUTP 修饰标准品从4pg/ μL开始稀释,5-OMe-UTP修饰标准品从8pg/μL 开始稀释,HRP-SA孵育时长由30min 调整至60min。


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柏莱源(天津)生物科技有限公司的优势:

现货供应:公司库存充足,可快速发货,减少用户等待时间。

效期保障:严格把控产品质量,确保试剂效期新鲜,保障实验结果的可靠性。

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