T7 RNA Polymerase ELISA 检测试剂盒说明（2G）说明书

货号：HG-TP001-2G

产品简介：

本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）法，将T7 RNA Polymerase标准品和待测样本加入预包被抗T7 RNA Polymerase抗体的酶标板，然后加入稀释后的生物i素标记的检测抗体和Streptavidin-HRP，形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP复合物，洗板后加入TMB显色液显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的T7 RNA Polymerase的量呈正相关。

检测范围：0.25 ~ 16 ng/mL
定  量  限：0.25 ng/mL
检  测  限：0.012 ng/mL
精  密  度：CV% < 10%, RE% < 士15%

规格：

96T

应用：

适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。

试剂盒组成：

备 注:未开封试剂盒，在2~8℃条件下有效期为12个月。

需自行准备的材料

◆酶标仪

◆去离子水

◆微孔板恒温振荡器

◆全新滤纸

◆微量移液器及吸头

◆涡旋振荡器

实验前准备

1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温（18~25°C）。所有试剂现配现用

2.1×洗液配制：浓缩洗液平衡至室温（18~25℃），不要有结晶。混匀后根据用量，取适量去离子水按1：9的比例，将10×洗液稀释10倍，最终得到1×洗液。

3.1×检测抗体配制：计算实验所需工作液体积，取适量100×检测抗体，用抗体稀释液按1：99稀释，充分混匀备用。

4.标准品的配制:取一支标准品，加200 μL去离子水，涡旋混匀，终浓度为160 ng/mL;取60uL浓度为160ng/mL标准液，加至540uL样品稀释液，涡旋混匀，终浓度为16ng/mL，用移液器将300uL样品稀释液移至每个离心管中，再按照下图进行1:1梯度梯度稀释。

5. 样品使用样品稀释液进行稀释，稀释后的样品即为：样品稀释工作液。

操作步骤

使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温（18~25°C）。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

1.使用前，将所有试剂充分混匀，避免产生气泡。

2.根据实验孔数量，确定所需的板条数目，剩余板条放回铝箔袋，密封。

3.加样与检测抗体工作液:每孔加入100μL标准品、样品稀释工作液、阴性对照至相应孔中。每孔加1x检测抗体50uL。用封板膜封板后置37°C恒温震荡培养箱，600-800rpm，温育60分钟。

4.洗涤:弃去各孔内液体，用1x洗液注满微孔(300 uL/孔)，静置30秒后弃去孔内液体;重复3次，每一次洗板完成后在滤纸上拍干。

5.显色:每孔分别加100 μL底物显色液，轻微振荡混匀后用封板膜封板置25℃℃显色15分钟。

6.测定:每孔加终止液100 L，轻微混匀。选择酶标仪主波长450nm，参考波长630nm，测定各孔吸光值(OD值)。

结果处理

1.标准曲线OD处理（见下例，仅为示例，具体以实际测定为准）

2.标准品理论浓度与对应OD值以四参数进行拟合，得到标准曲线（如下图所示）。

注意事项

1.样品首i次检测，建议进行至少3个连续倍数的稀释，以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。

2.试剂按标签说明储存，使用前室温平衡。

3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中密封，4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。

4.实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。

6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干，直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。

7.底物显色液对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免与金属接触影响结果。

8.本产品为一次性使用的试剂盒，请在效期内使用。

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