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T7 RNA Polymerase ELISA 检测试剂盒(2G)

产品简介

BlueKit系列T7 RNA Polymerase ELISA 检测试剂盒(2G)采用双抗夹心法定量检测RNA药物工艺中添加的T7 RNA Polymerase酶残留含量。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!

产品型号:HG-TP001-2G
更新时间:2025-04-08
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    T7 RNA Polymerase ELISA 检测试剂盒说明(2G)明书


HG-TP001-2G

T7 RNA Polymerase ELISA 检测试剂盒(2G)

产品简介:

本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法,将T7 RNA Polymerase标准品和待测样本加入预包被抗T7 RNA Polymerase抗体的酶标板,然后加入稀释后的生物i素标记的检测抗体和Streptavidin-HRP,形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP复合物,洗板后加入TMB显色液显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的T7 RNA Polymerase的量呈正相关。

检测范围:0.25 ~ 16 ng/mL
定  量  限:0.25 ng/mL
检  测  限:0.012 ng/mL
精  密  度:CV% < 10%, RE% < 士15%

规格:

96T

应用:

适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。

试剂盒组成:

组分规格配制
标准品(Standard)32 ng×6管建议按稀释方式操作
包被酶标板(Coated Plate)8孔×12条即用型
样品稀释液(Sample Diluent Buffer)15mL×4瓶即用型
浓缩洗液(Wash Buffer 10×)50 mL×1瓶用去离子水进行10倍稀释
检测抗体(Detection Antibody 100×)65μL×1管用抗体稀释液进行100倍稀释
抗体稀释液(Antibody Diluent Buffer)12 mL×1瓶即用型
TMB显色液(TMB Substrate)12 mL×1瓶即用型
终止液(Stop Solution)12 mL×1瓶即用型
封板膜(Sealing film)5张即用型
说明书1份即用型


备 注:未开封试剂盒,在2~8℃条件下有效期为12个月。




需自行准备的材料

◆酶标仪

◆去离子水

◆微孔板恒温振荡器

◆全新滤纸

◆微量移液器及吸头

◆涡旋振荡器


实验前准备

1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温(18~25°C)。所有试剂现配现用

2.1×洗液配制:浓缩洗液平衡至室温(18~25℃),不要有结晶。混匀后根据用量,取适量去离子水按1:9的比例,将10×洗液稀释10倍,最终得到1×洗液。

3.1×检测抗体配制:计算实验所需工作液体积,取适量100×检测抗体,用抗体稀释液按1:99稀释,充分混匀备用。

4.标准品的配制:取一支标准品,加200 μL去离子水,涡旋混匀,终浓度为160 ng/mL;取60uL浓度为160ng/mL标准液,加至540uL样品稀释液,涡旋混匀,终浓度为16ng/mL,用移液器将300uL样品稀释液移至每个离心管中,再按照下图进行1:1梯度梯度稀释。

5. 样品使用样品稀释液进行稀释,稀释后的样品即为:样品稀释工作液。


T7 RNA Polymerase ELISA 检测试剂盒(2G)

操作步骤

使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温(18~25°C)。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。


1.使用前,将所有试剂充分混匀,避免产生气泡。

2.根据实验孔数量,确定所需的板条数目,剩余板条放回铝箔袋,密封。

3.加样与检测抗体工作液:每孔加入100μL标准品、样品稀释工作液、阴性对照至相应孔中。每孔加1x检测抗体50uL。用封板膜封板后置37°C恒温震荡培养箱,600-800rpm,温育60分钟。

4.洗涤:弃去各孔内液体,用1x洗液注满微孔(300 uL/孔),静置30秒后弃去孔内液体;重复3次,每一次洗板完成后在滤纸上拍干。

5.显色:每孔分别加100 μL底物显色液,轻微振荡混匀后用封板膜封板置25℃℃显色15分钟。

6.测定:每孔加终止液100 L,轻微混匀。选择酶标仪主波长450nm,参考波长630nm,测定各孔吸光值(OD值)。

结果处理

1.标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)


标准品浓度(ng/mL)OD1OD2平均值
16 2.8708 2.9433 2.9071
8 2.0941 2.0731 2.0836
4 1.2382 1.2562 1.2472
2 0.7254 0.6866 0.7060
1 0.3880 0.3634 0.3757
0.5 0.2124 0.1877 0.2001
0.25 0.1233 0.117 0.1202
0.00 0.0393 0.0422 0.0408










2.标准品理论浓度与对应OD值以四参数进行拟合,得到标准曲线(如下图所示)。

T7 RNA Polymerase ELISA 检测试剂盒(2G)

注意事项

1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。

2.试剂按标签说明储存,使用前室温平衡。

3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。

4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。

6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。

7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。

8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。


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柏莱源(天津)生物科技有限公司的优势:

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