BlueKit系列T7 RNA Polymerase ELISA 检测试剂盒(2G)采用双抗夹心法定量检测RNA药物工艺中添加的T7 RNA Polymerase酶残留含量。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号:HG-TP001-2G
产品简介:
本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法,将T7 RNA Polymerase标准品和待测样本加入预包被抗T7 RNA Polymerase抗体的酶标板,然后加入稀释后的生物i素标记的检测抗体和Streptavidin-HRP,形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP复合物,洗板后加入TMB显色液显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的T7 RNA Polymerase的量呈正相关。
检测范围:0.25 ~ 16 ng/mL
定 量 限:0.25 ng/mL
检 测 限:0.012 ng/mL
精 密 度:CV% < 10%, RE% < 士15%
96T
适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。
组分 | 规格 | 配制 |
标准品(Standard) | 32 ng×6管 | 建议按稀释方式操作 |
包被酶标板(Coated Plate) | 8孔×12条 | 即用型 |
样品稀释液(Sample Diluent Buffer) | 15mL×4瓶 | 即用型 |
浓缩洗液(Wash Buffer 10×) | 50 mL×1瓶 | 用去离子水进行10倍稀释 |
检测抗体(Detection Antibody 100×) | 65μL×1管 | 用抗体稀释液进行100倍稀释 |
抗体稀释液(Antibody Diluent Buffer) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
TMB显色液(TMB Substrate) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
终止液(Stop Solution) | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜(Sealing film) | 5张 | 即用型 |
说明书 | 1份 | 即用型 |
备 注:未开封试剂盒,在2~8℃条件下有效期为12个月。
◆酶标仪
◆去离子水
◆微孔板恒温振荡器
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
实验前准备
1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温(18~25°C)。所有试剂现配现用
2.1×洗液配制:浓缩洗液平衡至室温(18~25℃),不要有结晶。混匀后根据用量,取适量去离子水按1:9的比例,将10×洗液稀释10倍,最终得到1×洗液。
3.1×检测抗体配制:计算实验所需工作液体积,取适量100×检测抗体,用抗体稀释液按1:99稀释,充分混匀备用。
4.标准品的配制:取一支标准品,加200 μL去离子水,涡旋混匀,终浓度为160 ng/mL;取60uL浓度为160ng/mL标准液,加至540uL样品稀释液,涡旋混匀,终浓度为16ng/mL,用移液器将300uL样品稀释液移至每个离心管中,再按照下图进行1:1梯度梯度稀释。
5. 样品使用样品稀释液进行稀释,稀释后的样品即为:样品稀释工作液。
操作步骤
使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温(18~25°C)。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。
1.使用前,将所有试剂充分混匀,避免产生气泡。
2.根据实验孔数量,确定所需的板条数目,剩余板条放回铝箔袋,密封。
3.加样与检测抗体工作液:每孔加入100μL标准品、样品稀释工作液、阴性对照至相应孔中。每孔加1x检测抗体50uL。用封板膜封板后置37°C恒温震荡培养箱,600-800rpm,温育60分钟。
4.洗涤:弃去各孔内液体,用1x洗液注满微孔(300 uL/孔),静置30秒后弃去孔内液体;重复3次,每一次洗板完成后在滤纸上拍干。
5.显色:每孔分别加100 μL底物显色液,轻微振荡混匀后用封板膜封板置25℃℃显色15分钟。
6.测定:每孔加终止液100 L,轻微混匀。选择酶标仪主波长450nm,参考波长630nm,测定各孔吸光值(OD值)。
结果处理
1.标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)
标准品浓度(ng/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
16 | 2.8708 | 2.9433 | 2.9071 |
8 | 2.0941 | 2.0731 | 2.0836 |
4 | 1.2382 | 1.2562 | 1.2472 |
2 | 0.7254 | 0.6866 | 0.7060 |
1 | 0.3880 | 0.3634 | 0.3757 |
0.5 | 0.2124 | 0.1877 | 0.2001 |
0.25 | 0.1233 | 0.117 | 0.1202 |
0.00 | 0.0393 | 0.0422 | 0.0408 |
2.标准品理论浓度与对应OD值以四参数进行拟合,得到标准曲线(如下图所示)。
1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。
2.试剂按标签说明储存,使用前室温平衡。
3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。
4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。
7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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