Polyplus jetPRIME转染试剂操作步骤

 jetPRIME简介

jetPRIME®是 Polyplus 公司推出的一款新型的，基于阳离子聚合物的转染试剂。可以有效的确保 DNA 和 siRNA 在哺乳细胞体内的高效率、可重复的转染。

jetPRIME®在多种细胞系上转染效率都非常有效，可有效的转染多种核酸类型，包括 DNA, siRNA，shRNA plasmid 等，并且可以用于 DNA 和 siRNA 共转染。

这款试剂单次转染使用极少量的核酸，从而降低细胞毒性。关于 siRNA 转染，DNA/siRNA 共转染的操作说明，请咨询产品技术支持。

DNA瞬转操作步骤

一、细胞接种

建议转染时细胞融合度为 60-80%。

举例：基于 6 孔板的操作，转染前 24 小时，接种 200，000 个细胞，2mL 细胞悬液。

其他培养条件，请参考表 1. jetPRIME® 在血清和抗生素的条件下非常稳定，因此，转染实验可以在有血清和抗生素的条件下进行。

表 1. 转染前建议的细胞接种量

二、DNA转染操作

以下操作为在 6 孔板中的操作条件。其他培养条件，请参考表 2.

1. 将 2ug DNA 加入到 200uL 的 jetPRIME® 缓冲液中（产品附带）。使用涡旋轻轻混匀。

2. 加入 4uL jetPRIME®，涡旋混匀 10s 并顺离。 

3. 室温下孵育 10 min. 

4. 将 200uL 的转染复合物滴加到含有血清的细胞中。

5. 轻轻摇动培养器皿以使转染复合物均匀的分布到细胞中。 

6. 如需，转染后 4 小时可以进行更换为wan全培养基，并继续培养。 

7. 转染 24 小时后或根据经验分析结果。

表 2. DNA 转染参照表

标准条件：DNA:jetPRIME=1:2(W/V)，即1ug DNA使用 2ul jetPRIME

注意：请使用jetPRIME缓冲液来稀释DNA

注意事项

1.细胞复苏后传代 2-3 代再进行转染操作。

2.转染时确保细胞状态好，细胞融合度为 60-80%。如细胞状态差，融合度过高或过低，则建议重新接种细胞进行转染操作。 

3. 稀释 DNA 时请使用产品中附带的 jetPRIME®缓冲液，不要使用 Opti-MEM。

4. 稀释 DNA 以及加入 jetPRIME®转染试剂后请立即涡旋混匀；如无涡旋仪，可上下颠倒离心管 4-5 次确保混匀。

5. 复合物孵育时间控制在 10 分钟左右。

6. jetPRIME®转染试剂可兼容血清和抗生素，转染前后可不用换液。如细胞属于敏感细胞，则转染后 4 小时可换液处理。

疑难解答

一、DNA 转染效率低可能的因素和改进措施 

1.优化 DNA 和 jetPRIME®转染试剂用量。如细胞状态好，首先考虑增加 jetPRIME®转染试剂用量。如转染效率未明显提高，则增加 DNA 用量。 

2. 确保转染操作时细胞在含有血清的条件下培养。缺乏血清时，细胞状态不佳，则转染会受影响。 

3. 确保使用 jetPRIME®缓冲液来稀释核酸。

4. 使用带有报告基因的质粒，例如有荧光素酶或 GFP 标记的阳性对照。 

5. 质粒的浓度建议在 0.3-1 ug/uL。 

6. 如细胞为已知的难转染细胞，则起始 DNA 用量增加到表 2 中建议的 1.5 倍。如观察到细胞毒性，则降低 DNA 用量。 

7. 使用高质量的质粒，需要去除内毒素，不含蛋白或 RNA (OD260/280>1.8)。

二、细胞毒性大可能的因素和改进措施

1.转染后 24 小时检测转染效率。 

2. 转染后 4 小时换液。

3. 确保使用 jetPRIME®缓冲液来稀释核酸。 

4. 减少 jetPRIME®转染试剂用量。 

5. 确保质粒无内毒素。 

6. 验证质粒对应蛋白的毒性。如果蛋白对细胞有毒性，则降低 DNA 用量