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细胞冻存的步骤与注意事项

更新时间:2024-05-08点击次数:111

为什么培养的细胞要冻存?冻存的通用步骤是什么?有什么注意事项?以上三个问题就是本期我们要探讨的内容,

为什么要冻存?

首先,细胞培养过程中,考虑到细胞株传代次数逐渐增加后,细胞变异的可能性将增大,继续培养的话细胞株可能会出现老化、状态下降、丢失一些该细胞的特性的现象,对后续实验造成影响;

此外,如果该细胞株特别珍贵,属于实验室重要资源,对细胞进行大规模的保存,能有效降低课题项目执行的风险;

最后,就是常见的风险规避问题,正所谓人有失手、马有失蹄,再熟练的实验操作者、再厉害的实验设备也是有出问题的可能,一旦出问题,意味着细胞资源的损失。

基于以上几点,细胞冻存对于一个实验室或个人来说,是非常必要的操作。

细胞冻存的通用步骤

既然了解了冻存的必要性,接下来我们讲一下冻存细胞的通用步骤。这个步骤适用于绝大多数的细胞以及绝大多数的实验室环境,它并不需要特别的试剂耗材。

当细胞培养至对数生长期晚期,但未进入平台期之前,也就是生长密度达到90%以上未到100%之前,此时贴壁生长的细胞依然处于单层细胞状态。将该细胞消化,并进行计数。

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然后通过调整细胞悬液体积,将细胞密度调整为2X10^62X10^7/mL。与此同时,使用细胞培养级别的DMSOwan全培养基混合,配制冻存液,冻存液成分的体积比应该为DMSO20%wan全培养基80%

将配置好的冻存液与细胞悬液按照体积1:1的比例进行混合,转移到冻存管内,做好标记,完成密封。

接下来,按照4度半小时、-20度一小时、-80度过夜的顺序逐步将冻存管的温度下降。

如果实验室内有程序降温盒,则可以直接将冻存管放入盒内,实现温度的稳步下降。最后,将冻存管从-80度转移至液氮罐内,进行长期保存。

细胞冻存的注意事项

1 在冻存之前,确保细胞状态良好。包括:细胞生长密度符合上述规定、细胞无污染、细胞形态良好没有变异。

2 DMSO可以溶解部分滤膜,如果要进行过滤,应该选择不会被DMSO降解的滤器,并且操作时务必带手套。

3 冻存管的管盖并不是拧得越紧越好,因为管盖内有O型橡胶圈,拧得太紧会让其变形,造成泄漏。当然,太松也会泄漏。

4 细胞冻存的密度应该要比传代时的密度要高得多,假如传代时的密度是1X10^ 5/mL,那么冻存时可以将密度提高到100倍。

等到了复苏后,再将密度稀释为1/20也依然能保持较高的生长密度,但与此同时,残留的DMSO对细胞的影响则会大大降低。

5 冻存应遵循慢冻,复苏则相反,应快速升温。慢冻的原因是为了避免降温时,细胞内的水分还未来得及脱离细胞,但却形成冰晶,对细胞造成损伤。

但也要注意,慢冻不等于无限制的缓慢降温,因为太慢,也会促成水分形成冰晶。理想的降温速度应该是1/分钟的下降速度。

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其次,D2650在生物领域的应用非常广泛。它可以用作细胞冷冻保护剂,能保护细胞免受冰晶导致的机械损伤。在细胞培养中,D2650被广泛应用于原代、继代培养和重组的异倍体和杂交瘤细胞系、胚胎干细胞以及造血干细胞的冻存。同时,由于其优秀的溶解性和稳定性,D2650还可以用于聚合酶链式反应(PCR)等化学反应。

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综上所述,D2650这款化学试剂以其出色的溶解性、热稳定性、生物应用广泛性和高品质等特点,成为了科研和工业生产中的重要工具。无论是用于化学反应还是细胞培养,D2650都能提供优秀的性能和可靠的品质。

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以上就是有关细胞冻存的步骤与注意事项,柏莱源生物预祝您试验成功!


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