庆大-霉素残留 ELISA  检测试剂盒说明书

货号：HG-GE001

产品简介：

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法测定样品中庆大-霉素的微量残留。包被酶标板中预包被偶联抗原，样本中残留的庆大-霉素和酶标板上预包被的偶联抗原竞争抗庆大-霉素抗体，加入酶标二抗，之后通过加入 TMB底物显色，使用酶标仪在 450nm/630nm 波长下测定吸光度（OD值），吸光度与样品中庆大-霉素的含量成负相关。

检测范围: 0.1~10 ng/mL

定量限:0.1ng/mL
检 测 限:<0.1ng/mL
准确度:70%~130%

规格：

96T

应用：

适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。

试剂盒组成：

备 注:未开封试剂盒应在 2~8℃条件下避光保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在 2-8℃条件下避光保存。

需自行准备的材料

◆酶标仪

◆去离子水

◆恒温培养箱

◆全新滤纸

◆微量移液器及吸头

◆涡旋振荡器

实验前准备

1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。

2.1x洗液配制：浓缩洗液平衡至室温，不要有结晶。混匀后根据用量，取适量用超纯水按1：19的比例，将10x洗液稀释20倍，最终得到1x洗液。

3.显色液配制:将显色液 A、显色液B等体积混合，混匀后避光放置。(注意:时间不能放置太久，一般使用前的10min 配制，如混合后的显色液已经变蓝，请勿使用)。

4.标准品的配制:

用样品稀释液将标准品稀释至 10ng/mL，然后用 2.5 倍倍比稀释的方法配制标准品(每次实验使用新配制的标准溶液)，如下图:

操作步骤

使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

1.试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。

2.酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋低温保存。

3.样本孵育:每孔中加入 50uL 标准品/空白(样品稀释液)/样品，之后再加入 50μL 检测抗体，用封板膜封板，然后置于37°C避光静置温育 30min。

4.洗板:弃去孔中液体，加入1x洗液(250uL/孔)洗板3次，拍干酶标板中残留液体。

5.酶结合物孵育:将酶结合物加入酶标板中，100 uL/孔，37℃℃静置孵育 30 min。

6.洗板:同步骤 4。

7.显色:将预先配置好的显色液按 100uL/孔加入酶标板中，用封板膜封板，37℃避光静置温育 15min。

8.终止:加入 100 μL/孔终止液至酶标板中，轻轻震动酶标板至显色均匀。

9.读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长，630nm 作为参比波长。

结果处理

1.吸光度值的计算

每个标准品或样品的吸光度值为 OD450nm-0D630nm。

2.百分吸光度的计算

每个标准品或样本的平均吸光度值(双孔)除以 0ng/mL标准品的平均吸光度值再乘以 100%，即为百分吸光度:

百分吸光度(%)=B/B0x100%

B:标准品或样本的平均吸光度值
B0:0ng/mL标准品的平均吸光度值

3.标准曲线的绘制与计算

以标准品百分吸光度值为纵坐标Y，标准品浓度值为横坐标X，绘制标准曲线，推荐使用四参数 Logistic数学模型拟合方程:
Y=((A-D)/(1+(X/C)^B))+D

将样本的百分吸光度值代入标准曲线中，读出样本所对应的浓度值，乘以其对应的稀释倍数即为样本中庆大-霉素的实际浓度。

(以上标准曲线图仅供参考，应以同次实验标准品所绘标准曲线为准)

注意事项

1.样品首i次检测，建议进行至少3个连续倍数的稀释，以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。

2.试剂按标签说明储存，使用前室温平衡。

3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中密封，4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。

4.实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。

6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干，直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。

7.底物显色液对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免与金属接触影响结果。

8.本产品为一次性使用的试剂盒，请在效期内使用。

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