BlueKit系列庆大-霉素残留 ELISA 检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法测定样品中庆大-霉素的微量残留。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号:HG-GE001
产品简介:
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法测定样品中庆大-霉素的微量残留。包被酶标板中预包被偶联抗原,样本中残留的庆大-霉素和酶标板上预包被的偶联抗原竞争抗庆大-霉素抗体,加入酶标二抗,之后通过加入 TMB底物显色,使用酶标仪在 450nm/630nm 波长下测定吸光度(OD值),吸光度与样品中庆大-霉素的含量成负相关。
检测范围: 0.1~10 ng/mL
定量限:0.1ng/mL
检 测 限:<0.1ng/mL
准确度:70%~130%
96T
适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。
组分 | 规格 | 配制 |
标准品(100ng/mL)Standard | 1mLx1管 | 用样品稀释液进行梯度稀释 |
包被酶标板Coated Plate | 8孔x12条 | 即用型 |
样品稀释液Sample Diluent | 30mL x1瓶 | 即用型 |
浓缩洗液Wash Buffer(20×) | 50 mL×1瓶 | 用超纯水进行20倍稀释 |
检测抗体Detection Antibody | 7mL x1瓶 | 即用型 |
酶结合物Streptavidin-HRP | 12mL x1瓶 | 即用型 |
显色液ASubstrate A | 8 mL×1瓶 | 即用型 |
显色液BSubstrate B | 8 mL×1瓶 | 即用型 |
终止液Stop Solution | 10 mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜Sealing film | 5张 | 即用型 |
说明书 | 1份 | 即用型 |
备 注:未开封试剂盒应在 2~8℃条件下避光保存,有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在 2-8℃条件下避光保存。
◆酶标仪
◆去离子水
◆恒温培养箱
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
实验前准备
1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。
2.1x洗液配制:浓缩洗液平衡至室温,不要有结晶。混匀后根据用量,取适量用超纯水按1:19的比例,将10x洗液稀释20倍,最终得到1x洗液。
3.显色液配制:将显色液 A、显色液B等体积混合,混匀后避光放置。(注意:时间不能放置太久,一般使用前的10min 配制,如混合后的显色液已经变蓝,请勿使用)。
4.标准品的配制:
用样品稀释液将标准品稀释至 10ng/mL,然后用 2.5 倍倍比稀释的方法配制标准品(每次实验使用新配制的标准溶液),如下图:
操作步骤
使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。
1.试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。
2.酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋低温保存。
3.样本孵育:每孔中加入 50uL 标准品/空白(样品稀释液)/样品,之后再加入 50μL 检测抗体,用封板膜封板,然后置于37°C避光静置温育 30min。
4.洗板:弃去孔中液体,加入1x洗液(250uL/孔)洗板3次,拍干酶标板中残留液体。
5.酶结合物孵育:将酶结合物加入酶标板中,100 uL/孔,37℃℃静置孵育 30 min。
6.洗板:同步骤 4。
7.显色:将预先配置好的显色液按 100uL/孔加入酶标板中,用封板膜封板,37℃避光静置温育 15min。
8.终止:加入 100 μL/孔终止液至酶标板中,轻轻震动酶标板至显色均匀。
9.读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长,630nm 作为参比波长。
结果处理
1.吸光度值的计算
每个标准品或样品的吸光度值为 OD450nm-0D630nm。
2.百分吸光度的计算
每个标准品或样本的平均吸光度值(双孔)除以 0ng/mL标准品的平均吸光度值再乘以 100%,即为百分吸光度:
百分吸光度(%)=B/B0x100%
B:标准品或样本的平均吸光度值
B0:0ng/mL标准品的平均吸光度值
3.标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光度值为纵坐标Y,标准品浓度值为横坐标X,绘制标准曲线,推荐使用四参数 Logistic数学模型拟合方程:
Y=((A-D)/(1+(X/C)^B))+D
将样本的百分吸光度值代入标准曲线中,读出样本所对应的浓度值,乘以其对应的稀释倍数即为样本中庆大-霉素的实际浓度。
标准曲线ng/mL | 百分吸光度% |
10 | 7.38 |
4 | 14.19 |
1.6 | 31.01 |
0.64 | 58.04 |
0.256 | 74.26 |
0.1024 | 82.67 |
0 | 100.00 |
(以上标准曲线图仅供参考,应以同次实验标准品所绘标准曲线为准)
1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。
2.试剂按标签说明储存,使用前室温平衡。
3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。
4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。
7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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