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细胞残留人 TGF-B1 ELISA 检测试剂盒

产品简介

BlueKit系列细胞残留人 TGF-B1 ELISA 检测试剂盒采用用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!

产品型号:HG-TG001
更新时间:2025-04-07
访问量:106
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    细胞残留人 TGF-B1 ELISA  检测试剂盒说明书


HG-TG001

细胞残留人 TGF-B1 ELISA 检测试剂盒

产品简介:

本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法,将人TGF-β1标准品和待测样本加入预包被抗人TGF-β1抗体的酶标板,然后加入稀释后的生物i素标记的人TGF-β1检测抗体,最后加入Streptavidin-HRP,形成抗体+抗原+抗体-Biotin+SA-HRP复合物,洗板后加入TMB显色液显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的人TGF-β1的量呈正相关。


检测范围:156.25~10000pg/mL

灵敏度:33.32 pg/mL

规格:

96T

应用:

适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。

试剂盒组成:

组分规格配制
标准品Standard冻干粉x2支用检测缓冲液梯度稀释
包被酶标板Coated Plate8孔x12条即用型
检测缓冲液Assay Buffer12mL x1瓶即用型
酸性缓冲液Acid Buffer1管即用型
碱性缓冲液Alkali Buffer1管即用型
浓缩洗液Wash Buffer(10×)50 mL×1瓶用超纯水进行10倍稀释。
100x检测抗体Detection Antibody1管用检测缓冲液进行100倍稀释
酶结合物Streptavidin-HRP12mL x1瓶即用型
TMB显色液TMB Substrate12 mL×1瓶即用型
终止液Stop Solution12mL×1瓶即用型
封板膜Sealing film5张即用型
说明书1份即用型

备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃,有效期12个月。




需自行准备的材料

◆酶标仪

◆去离子水

◆恒温培养箱

◆全新滤纸

◆微量移液器及吸头

◆涡旋振荡器


实验前准备

1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。

2.1x洗液配制:浓缩洗液平衡至室温不要有结晶。混匀后根据用量,取适量用超纯水按1:9的比例,将10x洗液稀释10倍,最终得到1x洗液。

3.1x检测抗体配制:混匀后根据用量,取适量用检测缓冲液按 1:99 的比例,将 100x 检测抗体稀释 100 倍,最终得到

1x 检测抗体。

4.标准品的配制:
取1支标准品冻干粉,按管壁标识加入超纯水进行溶解得到浓度100ng/mL的人TGF-βB1。
取8支 1.5 mL 离心管,每支管子先加入 150 μL 检测缓冲液,使用溶解后的 100ng/mL 标准品进行 1:1稀释。每一步稀释都需要充分混匀。检测缓冲液作为空白浓度标准品(0pg/mI)。



细胞残留人 TGF-B1 ELISA 检测试剂盒

5.样本预处理:取细胞培养上清、尿液、血清或血浆等样本类型 20 uL 至离心管,加入 20 uL 酸性缓冲液,混匀后室温孵育 10 分钟;再加入 20L 碱性缓冲液中和样本并混匀;最后用检测缓冲液稀释活化后的样本,样本可参考以下稀释倍数。代入标曲计算的样本浓度需乘以稀释倍数。

6.样本稀释:

人血清需要用检测缓冲液稀释 20 倍(10uL 活化后样本加 190uL 检测缓冲液,最终稀释倍数为 60 倍)。

细胞培养上清(人类和非人类)需要根据样本实际浓度进行稀释(如果不稀释,最终稀释倍数为3倍)。

人类尿液样本需要根据样本实际浓度进行稀释(如果不稀释,最终稀释倍数为3倍)。

人血浆需要用检测缓冲液稀释8倍(25 L 活化后样本加 175 uL 检测缓冲液,最终稀释倍数为 24 倍)。

小鼠、大鼠血清或血浆需要稀释 50 倍(10 μL 活化后样本加 490 uL 检测缓冲液,最终稀释倍数为 150 倍)。

操作步骤

使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

1. 试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。
2. 酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存。
3. 每孔加入50μL检测缓冲液。
4. 样本及检测抗体孵育:加入标准品和待测样本,50 μL/孔,确保 15 min 内完成点样。再向每孔加入50 μL 1x检测抗体。用封板膜封板,置于恒温孵育器,500转/分钟、25℃孵育30分钟。
5. 洗板:弃去孔中液体,加入 1×洗液(300 μL/孔)洗板4次,拍干酶标板中残留液体。

6. 酶结合物孵育:将酶结合物加入酶标板中,100 μL/孔,用封板膜封板,置于恒温孵育器,500转/分钟、25℃孵育30分钟。
7. 洗板:同步骤5。
8. 显色:每孔加入 100 μl 显色底物 TMB,室温孵育15~20 分钟。
9. 终止:每孔加入 100 μL终止液,轻轻震动酶标板至显色均匀。
10. 读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长,630nm 作为参比波长。

结果处理

1. 标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)

标准品浓度(pg/mL)OD1OD2平均值
10000 3.3531 3.2747 3.3139 
5000 1.9813 2.0695 2.0254 
2500 1.1123 1.1675 1.1399 
1250 0.5891 0.6252 0.6072 
625 0.3551 0.3739 0.3645 
312.5 0.2321 0.2237 0.2279 
156.25 0.1488 0.1692 0.159 
0.00 0.0886 0.0786 0.0836 










2. 标准品理论浓度与对应 OD 值以四参数进行拟合,得到标准曲线(如下图所示)。


细胞残留人 TGF-B1 ELISA 检测试剂盒

注意事项

1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。

2.试剂按标签说明储存,使用前室温平衡。

3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。

4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。

6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。

7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。

8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。


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柏莱源(天津)生物科技有限公司的优势:

现货供应:公司库存充足,可快速发货,减少用户等待时间。

效期保障:严格把控产品质量,确保试剂效期新鲜,保障实验结果的可靠性。

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定制化服务:根据用户需求,提供个性化的产品和服务解决方案。

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