细胞残留人 TGF-B1 ELISA  检测试剂盒说明书

货号：HG-TG001

产品简介：

本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）法，将人TGF-β1标准品和待测样本加入预包被抗人TGF-β1抗体的酶标板，然后加入稀释后的生物i素标记的人TGF-β1检测抗体，最后加入Streptavidin-HRP，形成抗体+抗原+抗体-Biotin+SA-HRP复合物，洗板后加入TMB显色液显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的人TGF-β1的量呈正相关。

检测范围:156.25~10000pg/mL

灵敏度:33.32 pg/mL

规格：

96T

应用：

适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。

试剂盒组成：

备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃，有效期12个月。

需自行准备的材料

◆酶标仪

◆去离子水

◆恒温培养箱

◆全新滤纸

◆微量移液器及吸头

◆涡旋振荡器

实验前准备

1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。

2.1x洗液配制：浓缩洗液平衡至室温，不要有结晶。混匀后根据用量，取适量用超纯水按1：9的比例，将10x洗液稀释10倍，最终得到1x洗液。

3.1x检测抗体配制:混匀后根据用量，取适量用检测缓冲液按 1:99 的比例，将 100x 检测抗体稀释 100 倍，最终得到

1x 检测抗体。

4.标准品的配制:
取1支标准品冻干粉，按管壁标识加入超纯水进行溶解得到浓度100ng/mL的人TGF-βB1。
取8支 1.5 mL 离心管，每支管子先加入 150 μL 检测缓冲液，使用溶解后的 100ng/mL 标准品进行 1:1稀释。每一步稀释都需要充分混匀。检测缓冲液作为空白浓度标准品(0pg/mI)。

5.样本预处理:取细胞培养上清、尿液、血清或血浆等样本类型 20 uL 至离心管，加入 20 uL 酸性缓冲液，混匀后室温孵育 10 分钟;再加入 20L 碱性缓冲液中和样本并混匀;最后用检测缓冲液稀释活化后的样本，样本可参考以下稀释倍数。代入标曲计算的样本浓度需乘以稀释倍数。

6.样本稀释:

人血清需要用检测缓冲液稀释 20 倍(10uL 活化后样本加 190uL 检测缓冲液，最终稀释倍数为 60 倍)。

细胞培养上清(人类和非人类)需要根据样本实际浓度进行稀释(如果不稀释，最终稀释倍数为3倍)。

人类尿液样本需要根据样本实际浓度进行稀释(如果不稀释，最终稀释倍数为3倍)。

人血浆需要用检测缓冲液稀释8倍(25 L 活化后样本加 175 uL 检测缓冲液，最终稀释倍数为 24 倍)。

小鼠、大鼠血清或血浆需要稀释 50 倍(10 μL 活化后样本加 490 uL 检测缓冲液，最终稀释倍数为 150 倍)。

操作步骤

使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

1. 试剂准备：提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。
2. 酶标板条确定：计算待测样本和标准品所需酶标板条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口，低温保存。
3. 每孔加入50μL检测缓冲液。
4. 样本及检测抗体孵育：加入标准品和待测样本，50 μL/孔，确保 15 min 内完成点样。再向每孔加入50 μL 1x检测抗体。用封板膜封板，置于恒温孵育器，500转/分钟、25℃孵育30分钟。
5. 洗板：弃去孔中液体，加入 1×洗液（300 μL/孔）洗板4次，拍干酶标板中残留液体。

6. 酶结合物孵育：将酶结合物加入酶标板中，100 μL/孔，用封板膜封板，置于恒温孵育器，500转/分钟、25℃孵育30分钟。
7. 洗板：同步骤5。
8. 显色：每孔加入 100 μl 显色底物 TMB，室温孵育15~20 分钟。
9. 终止：每孔加入 100 μL终止液，轻轻震动酶标板至显色均匀。
10. 读值：20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长，630nm 作为参比波长。

结果处理

1. 标准曲线OD处理（见下例，仅为示例，具体以实际测定为准）

2. 标准品理论浓度与对应 OD 值以四参数进行拟合，得到标准曲线(如下图所示)。

注意事项

1.样品首i次检测，建议进行至少3个连续倍数的稀释，以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。

2.试剂按标签说明储存，使用前室温平衡。

3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中密封，4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。

4.实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。

6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干，直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。

7.底物显色液对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免与金属接触影响结果。

8.本产品为一次性使用的试剂盒，请在效期内使用。

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