BlueKit系列细胞残留人 TGF-B1 ELISA 检测试剂盒采用用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号:HG-TG001
产品简介:
本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法,将人TGF-β1标准品和待测样本加入预包被抗人TGF-β1抗体的酶标板,然后加入稀释后的生物i素标记的人TGF-β1检测抗体,最后加入Streptavidin-HRP,形成抗体+抗原+抗体-Biotin+SA-HRP复合物,洗板后加入TMB显色液显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的人TGF-β1的量呈正相关。
检测范围:156.25~10000pg/mL
灵敏度:33.32 pg/mL
96T
适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。
组分 | 规格 | 配制 |
标准品Standard | 冻干粉x2支 | 用检测缓冲液梯度稀释 |
包被酶标板Coated Plate | 8孔x12条 | 即用型 |
检测缓冲液Assay Buffer | 12mL x1瓶 | 即用型 |
酸性缓冲液Acid Buffer | 1管 | 即用型 |
碱性缓冲液Alkali Buffer | 1管 | 即用型 |
浓缩洗液Wash Buffer(10×) | 50 mL×1瓶 | 用超纯水进行10倍稀释。 |
100x检测抗体Detection Antibody | 1管 | 用检测缓冲液进行100倍稀释 |
酶结合物Streptavidin-HRP | 12mL x1瓶 | 即用型 |
TMB显色液TMB Substrate | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
终止液Stop Solution | 12mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜Sealing film | 5张 | 即用型 |
说明书 | 1份 | 即用型 |
备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃,有效期12个月。
◆酶标仪
◆去离子水
◆恒温培养箱
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
实验前准备
1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。
2.1x洗液配制:浓缩洗液平衡至室温,不要有结晶。混匀后根据用量,取适量用超纯水按1:9的比例,将10x洗液稀释10倍,最终得到1x洗液。
3.1x检测抗体配制:混匀后根据用量,取适量用检测缓冲液按 1:99 的比例,将 100x 检测抗体稀释 100 倍,最终得到
1x 检测抗体。
4.标准品的配制:
取1支标准品冻干粉,按管壁标识加入超纯水进行溶解得到浓度100ng/mL的人TGF-βB1。
取8支 1.5 mL 离心管,每支管子先加入 150 μL 检测缓冲液,使用溶解后的 100ng/mL 标准品进行 1:1稀释。每一步稀释都需要充分混匀。检测缓冲液作为空白浓度标准品(0pg/mI)。
5.样本预处理:取细胞培养上清、尿液、血清或血浆等样本类型 20 uL 至离心管,加入 20 uL 酸性缓冲液,混匀后室温孵育 10 分钟;再加入 20L 碱性缓冲液中和样本并混匀;最后用检测缓冲液稀释活化后的样本,样本可参考以下稀释倍数。代入标曲计算的样本浓度需乘以稀释倍数。
6.样本稀释:
人血清需要用检测缓冲液稀释 20 倍(10uL 活化后样本加 190uL 检测缓冲液,最终稀释倍数为 60 倍)。
细胞培养上清(人类和非人类)需要根据样本实际浓度进行稀释(如果不稀释,最终稀释倍数为3倍)。
人类尿液样本需要根据样本实际浓度进行稀释(如果不稀释,最终稀释倍数为3倍)。
人血浆需要用检测缓冲液稀释8倍(25 L 活化后样本加 175 uL 检测缓冲液,最终稀释倍数为 24 倍)。
小鼠、大鼠血清或血浆需要稀释 50 倍(10 μL 活化后样本加 490 uL 检测缓冲液,最终稀释倍数为 150 倍)。
操作步骤
使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。
1. 试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。
2. 酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存。
3. 每孔加入50μL检测缓冲液。
4. 样本及检测抗体孵育:加入标准品和待测样本,50 μL/孔,确保 15 min 内完成点样。再向每孔加入50 μL 1x检测抗体。用封板膜封板,置于恒温孵育器,500转/分钟、25℃孵育30分钟。
5. 洗板:弃去孔中液体,加入 1×洗液(300 μL/孔)洗板4次,拍干酶标板中残留液体。
6. 酶结合物孵育:将酶结合物加入酶标板中,100 μL/孔,用封板膜封板,置于恒温孵育器,500转/分钟、25℃孵育30分钟。
7. 洗板:同步骤5。
8. 显色:每孔加入 100 μl 显色底物 TMB,室温孵育15~20 分钟。
9. 终止:每孔加入 100 μL终止液,轻轻震动酶标板至显色均匀。
10. 读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长,630nm 作为参比波长。
结果处理
1. 标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)
标准品浓度(pg/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
10000 | 3.3531 | 3.2747 | 3.3139 |
5000 | 1.9813 | 2.0695 | 2.0254 |
2500 | 1.1123 | 1.1675 | 1.1399 |
1250 | 0.5891 | 0.6252 | 0.6072 |
625 | 0.3551 | 0.3739 | 0.3645 |
312.5 | 0.2321 | 0.2237 | 0.2279 |
156.25 | 0.1488 | 0.1692 | 0.159 |
0.00 | 0.0886 | 0.0786 | 0.0836 |
2. 标准品理论浓度与对应 OD 值以四参数进行拟合,得到标准曲线(如下图所示)。
1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。
2.试剂按标签说明储存,使用前室温平衡。
3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。
4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。
7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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