BlueKit系列人颗粒酶B ELISA检测试剂盒采用用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号:HG-GB001
产品简介:
本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法,将人颗粒酶B标准品和待测样本加入预包被抗人颗粒酶B抗体的酶标板,然后加入稀释后的生物i素标记的人颗粒酶B检测抗体,最后加入 Streptavidin-HRP,形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物,洗板后加入 TMB 显色液显色。TMB 在 HRP 酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的人颗粒酶B的量呈正相关。
检测范围: 6.86~5000 pg/mL
灵敏度:1.12 pg/mL
96T
适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。
组分 | 规格 | 配制 |
标准品Standard | S0~S7,S | 按说明书进行操作 |
包被酶标板Coated Plate | 8孔x12条 | 即用型 |
检测缓冲液Assay Buffer | 12mL x1瓶 | 即用型 |
浓缩洗液Wash Buffer(10×) | 50 mL×1瓶 | 用超纯水进行10倍稀释 |
检测抗体Dection Antibody | 6mL xl瓶 | 即用型 |
酶结合物Streptavidin-HRP | 12mL xl瓶 | 即用型 |
TMB显色液TMB Substrate | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
终止液Stop Solution | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜Sealing film | 5张 | 即用型 |
说明书 | 1份 | 即用型 |
备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃,有效期12个月。
◆酶标仪
◆去离子水
◆恒温培养箱
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
实验前准备
1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。
2.1x洗液配制:浓缩洗液平衡至室温,不要有结晶。混匀后根据用量,取适量用超纯水按1:9的比例,将10x洗液稀释10倍,最终得到1x洗液。
3.标准品的配制:
● 血清和血浆样本,使用即用型标准品S0~S7。
● 其他类型样本,使用高浓度标准品S(50000pg/mL)进行梯度稀释。准备8个1.5mL离心管,按照标准品浓度依次标记。取30μL标准品S+270μL SPB(即样品基质,如培养基、稀释液、自制buffer等) ,所得溶液浓度为5000pg/mL。每个离心管中加入200μL SPB,将5000pg/mL的高浓度标准品按1:2进行梯度稀释。SPB用作零标准(0pg/mL)。
操作步骤
使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。
1. 试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。
2. 酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存。
3. 每孔加入50μL检测缓冲液。
4. 样本及检测抗体孵育:加入标准品和待测样本,50 μL/孔,确保 15 min 内完成点样。再向每孔加入50 μL 检测抗体。用封板膜封板,置于恒温孵育器,500转/分钟、25℃孵育1小时。
5. 洗板:弃去孔中液体,加入 1×洗液(300 μL/孔)洗板4次,拍干酶标板中残留液体。
6. 酶结合物孵育:将酶结合物加入酶标板中,100 μL/孔,用封板膜封板,置于恒温孵育器,500转/分钟、25℃孵育30分钟。
7. 洗板:同步骤5。
8. 显色:每孔加入 100 μl 显色底物 TMB,室温孵育15~20 分钟。
9. 终止:每孔加入 100 μL终止液,轻轻震动酶标板至显色均匀。
10. 读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长,630nm 作为参比波长。
结果处理
1. 标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)
标准品浓度(pg/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
5000 | 3.4680 | 3.4540 | 3.4610 |
1666.67 | 1.6813 | 1.4737 | 1.5775 |
555.56 | 0.7201 | 0.7241 | 0.7221 |
185.19 | 0.2709 | 0.2741 | 0.2725 |
61.73 | 0.0973 | 0.0932 | 0.0953 |
20.58 | 0.0396 | 0.0387 | 0.0392 |
6.86 | 0.0187 | 0.0273 | 0.0230 |
0 | 0.0085 | 0.0082 | 0.0084 |
2. 标准品理论浓度与对应 OD 值以四参数进行拟合,得到标准曲线(如下图所示)。
1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标曲范围内产生至少一个稀释后样品。
2.试剂按标签说明储存,使用前室温平衡。
3.包被酶标板使用前请平衡至室温再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其他不用的试剂应包装好或盖好。
4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂的稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾放入反应孔中吸水。
7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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