BlueKit系列人肿瘤坏死因子(TNF-α)ELISA 检测试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号:HG-TA001
本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法,将人TNF-a标准品和待测样本加入预包被抗人 TNF-a抗体的酶标板,然后加入稀释后的生物i素标记的人 TNF-a检测抗体,最后加入 Streptavidin-HRP,形成抗体+抗原+抗体-Biotin+ SA-HRP 复合物,洗板后加入 TMB 显色液显色。TMB 在 HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的人 TNF-α 的量呈正相关。
检测范围: 1.37~1000pg/mL
灵敏度:0.21 pg/mL
96T
适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。
组分 | 规格 | 配制 |
标准品Standard(S,S1~S7,S0) | 300μLx9管 | S0~S7即用型, S按建议稀释方式操作 |
包被酶标板Coated Plate | 8孔×12条 | 即用型 |
检测缓冲液Assay Buffer | 12mL×1瓶 | 即用型 |
浓缩洗液Wash Buffer(10×) | 50 mL×1瓶 | 用超纯水进行10倍稀释 |
检测抗体Detection Antibody | 6mL x1瓶 | 即用型 |
酶结合物Streptavidin-HRP | 12mL x1瓶 | 即用型 |
TMB显色液TMB Substrate | 12mL×1瓶 | 即用型 |
终止液Stop Solution | 12mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜Sealing film | 5张 | 即用型 |
说明书 | 1份 | 即用型 |
备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃,有效期12个月。
◆酶标仪
◆去离子水
◆恒温培养箱
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
实验前准备
1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温(18~25°C)。所有试剂现配现用。
2.1x 洗液配制:浓缩洗液平衡至室温(18-25℃),不要有结晶。混匀后根据用量,取适量用超纯水按1:9的比例,将10x洗液稀释10倍,最终得到1x洗液。
3.标准品的配制:
S1至 S7 和 S0 用于血清和血浆。
其他类型样本,用缓冲液(SPB,样品基质)制备标准曲线,例如细胞培养上清液、组织研磨液、细胞裂解物等。尿样使用AB(检测缓冲液)制备标准曲线。
人TNFa标准品S(10000pg/mL)30μL+270μLSPB作为高标准(1000 pg/mL),每个稀释试管中加入 200 μLSPB,使用高标准品按 1:2 梯度稀释。每一步稀释必须充分混匀。SPB用作零标准(0pg/mL)。
操作步骤
使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温(18~25°C)。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。
1.试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。
2.酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存。
3.每孔加入 50uL 检测缓冲液。
4.样本及检测抗体孵育:每孔加入50 μL标准品和待测样本,确保15 min内完成点样。再向每孔加入50 μL 检测抗体。用封板膜封板,置于恒温孵育器,500转/分钟、25℃孵育1小时。
5.洗板:弃去孔中液体,加入1×洗液(300 μL/孔)洗板4次,拍干酶标板中残留液体。
6.酶结合物孵育:将酶结合物加入酶标板中,100 μL/孔,用封板膜封板,置于恒温孵育器,500转/分钟、25℃孵育30分钟。
7.洗板:同步骤 5。
8.每孔加入100 μL显色底物TMB,室温(18-25℃)孵育15~20分钟。
9.终止:每孔加入 100 uL终止液,轻轻震动酶标板至显色均匀。
10.读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长,630nm 作为参比波长。
结果处理
1. 标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)
标准品浓度(pg/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
1000.00 | 4.3651 | 4.1387 | 4.2519 |
333.33 | 2.4084 | 2.3694 | 2.3889 |
111.1l | 0.9071 | 0.9969 | 0.9520 |
37.04 | 0.3960 | 0.3896 | 0.3908 |
12.35 | 0.1693 | 0.1712 | 0.1703 |
4.12 | 0.0819 | 0.0885 | 0.0852 |
1.37 | 0.0588 | 0.0628 | 0.0608 |
0.00 | 0.0390 | 0.0402 | 0.0396 |
2. 标准品理论浓度与对应 OD 值以四参数进行拟合,得到标准曲线(如下图所示)。
1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标准曲线范围内产生至少一个稀释后样品。
2.试剂按标签说明储存,使用前室温(18-25°C)平衡。
3.包被酶标板使用前,请平衡至室温(18-25°C)再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月其余不用试剂应包装好或盖好。
4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸中上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。
7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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