BlueKit系列无机焦磷酸酶 ELISA 检测试剂盒采用用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号:HG-IP001
产品简介:
无机焦磷酸酶(Inorganix Pyrophosphatase,PPase)能够催化一分子焦磷酸盐转化为两分子磷酸盐离子。PPase 能够避免核酸扩增实验中因无机焦磷酸的累积而抑制反应体系。在 mRNA 疫苗制品的生产中会通过添加 PPase 来提高产量。因此,对mRNA 疫苗制品需要进行 PPase 残留量的检测。
本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法,将 PPase 标准品和待测样本加入预包被抗 PPase 抗体的酶标板,然后加入稀释后的生物i素标记的 PPase 检测抗体,最后加入 Streptavidin-HRP,形成抗体+抗原+抗体-Biotin+SA-HRP 复合物,洗板后加入 TMB 显色液显色。TMB 在 HRP 酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的 PPase 的量呈正相关。
检测范围: 0.25~16 ng/mL
定量限:0.25 ng/mL
96T
适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。
组分 | 规格 | 配制 |
标准品Standard | 冻干粉x2支 | 冻干粉用1mL稀释液1溶解,再进行梯度稀释 |
包被酶标板Coated Plate | 8孔x12条 | 即用型 |
稀释液1 Dilution Buffer 1 | 45mLx1瓶 | 即用型 |
稀释液2 Dilution Buffer 2 | 30mLx1瓶 | 即用型 |
浓缩洗液Wash Buffer(20×) | 50 mL×1瓶 | 用超纯水进行20倍稀释 |
检测抗体Detection Antibody(100×) | 120μL×1管 | 用稀释液2进行100倍稀释 |
酶结合物Streptavidin-HRP(500x) | 60μL×1管 | 用稀释液2进行500倍稀释 |
TMB显色液TMB Substrate | 15 mL×1瓶 | 即用型 |
终止液Stop Solution | 10 mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜Sealing film | 5张 | 即用型 |
说明书 | 1份 | 即用型 |
备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃,有效期12个月。
◆酶标仪
◆去离子水
◆恒温培养箱
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
实验前准备
1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。
2.1x洗液配制:浓缩洗液平衡至室温(18~25°C),不要有结晶。混匀后根据用量,取适量用超纯水按 1:19 的比例,将20x洗液稀释 20 倍,最终得到1x洗液。
3.1x 检测抗体配制:100x检测抗体充分溶解后,离心,取适量然后用稀释液2以1:99 的比例进行稀释。
4.1x酶结合物配制:500x酶结合物充分溶解后,离心,取适量然后用稀释液2以1:499 的比例进行稀释。
5.标准品的制备:
准备8个 1.5mL 离心管,按照标准品浓度依次标记。取一支冻干标准品加入 1mL稀释液 1,彻i底溶解后静置 10 分钟,所得溶液浓度为 64ng/mL。第一个离心管中加入 450μL 稀释液 1,其余各离心管分别加入 300uL 稀释液 1,先取 150uL 溶解混匀的 64ng/mL 标准品加入到第一个离心管中充分混匀后即为 16ng/mL,再依次按下图进行梯度稀释:
操作步骤
使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。
1.试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。
2.酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存。
3.浸泡酶标板:加入 1xWash Buffer(300 μL/孔)浸泡酶标板,静置 30 秒后弃去孔中液体,拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响,确保最后一次拍板没有洗液残留。
4.样本孵育:加入标准品和待测样本,100 μL/孔,确保 15 min 内完成点样,37℃静置孵育1h。
5.洗板:弃去孔中液体,加入1xWash Buffer(300uL/孔)洗板五次,拍干酶标板。
6.检测抗体孵育:将 1x 检测抗体加入酶标板中,100 uL/孔,37℃静置孵育1h。
7.洗板:弃去孔中液体,加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次,拍干酶标板。
8.酶结合物孵育:将 1x 酶结合物加入酶标板中,100 μL/孔,37℃静置孵育 40 min。
9.洗板:弃去孔中液体,加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次,拍干酶标板。
10.显色:使用前的10 min 将底物液恢复至室温(18~25°℃),将底物液TMB加入酶标板中,100 uL/孔,37℃避光孵育 15
mine
11.终止:加入 50 uL/孔终止液至酶标板中,轻轻震动酶标板至显色均匀。
12.读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长,630nm 作为参比波长。
结果处理
1. 标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)
标准品浓度(ng/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
16 | 2.698 | 2.612 | 2.655 |
8 | 1.952 | 1.864 | 1.908 |
4 | 1.202 | 1.265 | 1.234 |
2 | 0.699 | 0.729 | 0.714 |
1 | 0.439 | 0.454 | 0.447 |
0.5 | 0.265 | 0.281 | 0.273 |
0.25 | 0.192 | 0.183 | 0.188 |
0 | 0.094 | 0.091 | 0.093 |
2. 标准品理论浓度与对应 OD 值以四参数进行拟合,得到标准曲线(如下图所示)。
1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标准曲线范围内产生至少一个稀释后样品。
2.试剂按标签说明储存,使用前室温(18~25℃℃)平衡。3.包被酶标板使用前,请平衡至室温(18~25°C)再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其余不用试剂应包装好或盖好。
4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸中上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。
7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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