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无机焦磷酸酶 ELISA 检测试剂盒

产品简介

BlueKit系列无机焦磷酸酶 ELISA 检测试剂盒采用用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!

产品型号:HG-IP001
更新时间:2025-04-09
访问量:79
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    无机焦磷酸酶ELISA 检测试剂盒说明书

号:HG-IP001

无机焦磷酸酶 ELISA 检测试剂盒

产品简介:

无机焦磷酸酶(Inorganix Pyrophosphatase,PPase)能够催化一分子焦磷酸盐转化为两分子磷酸盐离子。PPase 能够避免核酸扩增实验中因无机焦磷酸的累积而抑制反应体系。在 mRNA 疫苗制品的生产中会通过添加 PPase 来提高产量。因此,对mRNA 疫苗制品需要进行 PPase 残留量的检测。
本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法,将 PPase 标准品和待测样本加入预包被抗 PPase 抗体的酶标板,然后加入稀释后的生物i素标记的 PPase 检测抗体,最后加入 Streptavidin-HRP,形成抗体+抗原+抗体-Biotin+SA-HRP 复合物,洗板后加入 TMB 显色液显色。TMB 在 HRP 酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样
本中被检测到的 PPase 的量呈正相关。

检测范围: 0.25~16 ng/mL

定量限:0.25 ng/mL

规格:

96T

应用:

适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。

试剂盒组成:

组分规格配制
标准品Standard冻干粉x2支冻干粉用1mL稀释液1溶解,再进行梯度稀释
包被酶标板Coated Plate8孔x12条即用型
稀释液1 Dilution Buffer 145mLx1瓶即用型
稀释液2 Dilution Buffer 230mLx1瓶即用型
浓缩洗液Wash Buffer(20×)50 mL×1瓶用超纯水进行20倍稀释
检测抗体Detection Antibody(100×)120μL×1管用稀释液2进行100倍稀释
酶结合物Streptavidin-HRP(500x)60μL×1管用稀释液2进行500倍稀释
TMB显色液TMB Substrate15 mL×1瓶即用型
终止液Stop Solution10 mL×1瓶即用型
封板膜Sealing film5张即用型
说明书1份即用型


备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃,有效期12个月。



需自行准备的材料

◆酶标仪

◆去离子水

◆恒温培养箱

◆全新滤纸

◆微量移液器及吸头

◆涡旋振荡器


实验前准备

1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。

2.1x洗液配制:浓缩洗液平衡至室温(18~25°C),不要有结晶。混匀后根据用量,取适量用超纯水按 1:19 的比例,将20x洗液稀释 20 倍,最终得到1x洗液。

3.1x 检测抗体配制:100x检测抗体充分溶解后,离心,取适量然后用稀释液2以1:99 的比例进行稀释。
4.1x酶结合物配制:500x酶结合物充分溶解后,离心,取适量然后用稀释液2以1:499 的比例进行稀释。
5.标准品的制备:

准备8个 1.5mL 离心管,按照标准品浓度依次标记。取一支冻干标准品加入 1mL稀释液 1,彻i底溶解后静置 10 分钟,所得溶液浓度为 64ng/mL。第一个离心管中加入 450μL 稀释液 1,其余各离心管分别加入 300uL 稀释液 1,先取 150uL 溶解混匀的 64ng/mL 标准品加入到第一个离心管中充分混匀后即为 16ng/mL,再依次按下图进行梯度稀释:

无机焦磷酸酶 ELISA 检测试剂盒

操作步骤


使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

1.试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。

2.酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存。

3.浸泡酶标板:加入 1xWash Buffer(300 μL/孔)浸泡酶标板,静置 30 秒后弃去孔中液体,拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响,确保最后一次拍板没有洗液残留。

4.样本孵育:加入标准品和待测样本,100 μL/孔,确保 15 min 内完成点样,37℃静置孵育1h。

5.洗板:弃去孔中液体,加入1xWash Buffer(300uL/孔)洗板五次,拍干酶标板。

6.检测抗体孵育:将 1x 检测抗体加入酶标板中,100 uL/孔,37℃静置孵育1h。

7.洗板:弃去孔中液体,加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次,拍干酶标板。

8.酶结合物孵育:将 1x 酶结合物加入酶标板中,100 μL/孔,37℃静置孵育 40 min。

9.洗板:弃去孔中液体,加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次,拍干酶标板。
10.显色:使用前的10 min 将底物液恢复至室温(18~25°℃),将底物液TMB加入酶标板中,100 uL/孔,37℃避光孵育 15

mine

11.终止:加入 50 uL/孔终止液至酶标板中,轻轻震动酶标板至显色均匀。

12.读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长,630nm 作为参比波长。

结果处理

1. 标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)

标准品浓度(ng/mL)OD1OD2平均值
16 2.698 2.612 2.655 
1.952 1.864 1.908 
1.202 1.265 1.234 
0.699 0.729 0.714 
0.439 0.454 0.447 
0.5 0.265 0.281 0.273 
0.25 0.192 0.183 0.188 
0.094 0.091 0.093 










2. 标准品理论浓度与对应 OD 值以四参数进行拟合,得到标准曲线(如下图所示)。


无机焦磷酸酶 ELISA 检测试剂盒

注意事项

1.样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标准曲线范围内产生至少一个稀释后样品。

2.试剂按标签说明储存,使用前室温(18~25℃℃)平衡。3.包被酶标板使用前,请平衡至室温(18~25°C)再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其余不用试剂应包装好或盖好。

4.实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。

6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸中上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。

7.底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。

8.本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。

无机焦磷酸酶 ELISA 检测试剂盒产品订购,请联系柏莱源(天津)生物科技有限公司!

柏莱源(天津)生物科技有限公司的优势:

现货供应:公司库存充足,可快速发货,减少用户等待时间。

效期保障:严格把控产品质量,确保试剂效期新鲜,保障实验结果的可靠性。

专业技术支持:提供详细的实验方案和技术指导,帮助用户优化实验条件,提高实验成功率。

定制化服务:根据用户需求,提供个性化的产品和服务解决方案。

售后保障:完善的售后服务体系,及时解决用户在使用过程中遇到的问题。

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