无机焦磷酸酶ELISA 检测试剂盒说明书

货号：HG-IP001

产品简介：

无机焦磷酸酶(Inorganix Pyrophosphatase,PPase)能够催化一分子焦磷酸盐转化为两分子磷酸盐离子。PPase 能够避免核酸扩增实验中因无机焦磷酸的累积而抑制反应体系。在 mRNA 疫苗制品的生产中会通过添加 PPase 来提高产量。因此，对mRNA 疫苗制品需要进行 PPase 残留量的检测。
本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)法，将 PPase 标准品和待测样本加入预包被抗 PPase 抗体的酶标板，然后加入稀释后的生物i素标记的 PPase 检测抗体，最后加入 Streptavidin-HRP，形成抗体+抗原+抗体-Biotin+SA-HRP 复合物，洗板后加入 TMB 显色液显色。TMB 在 HRP 酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的 PPase 的量呈正相关。

检测范围: 0.25~16 ng/mL

定量限:0.25 ng/mL

规格：

96T

应用：

适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。

试剂盒组成：

备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃，有效期12个月。

需自行准备的材料

◆酶标仪

◆去离子水

◆恒温培养箱

◆全新滤纸

◆微量移液器及吸头

◆涡旋振荡器

实验前准备

1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温。所有试剂现配现用。

2.1x洗液配制:浓缩洗液平衡至室温(18~25°C)，不要有结晶。混匀后根据用量，取适量用超纯水按 1:19 的比例，将20x洗液稀释 20 倍，最终得到1x洗液。

3.1x 检测抗体配制:100x检测抗体充分溶解后，离心，取适量然后用稀释液2以1:99 的比例进行稀释。
4.1x酶结合物配制:500x酶结合物充分溶解后，离心，取适量然后用稀释液2以1:499 的比例进行稀释。
5.标准品的制备：

准备8个 1.5mL 离心管，按照标准品浓度依次标记。取一支冻干标准品加入 1mL稀释液 1，彻i底溶解后静置 10 分钟，所得溶液浓度为 64ng/mL。第一个离心管中加入 450μL 稀释液 1，其余各离心管分别加入 300uL 稀释液 1，先取 150uL 溶解混匀的 64ng/mL 标准品加入到第一个离心管中充分混匀后即为 16ng/mL，再依次按下图进行梯度稀释:

操作步骤

使用前所有试剂组分以及待测样本需要恢复室温。建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

1.试剂准备:提前准备好各种待测试剂、稀释好的标准品和待测样本。

2.酶标板条确定:计算待测样本和标准品所需酶标板条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口，低温保存。

3.浸泡酶标板:加入 1xWash Buffer(300 μL/孔)浸泡酶标板，静置 30 秒后弃去孔中液体，拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响，确保最后一次拍板没有洗液残留。

4.样本孵育:加入标准品和待测样本，100 μL/孔，确保 15 min 内完成点样，37℃静置孵育1h。

5.洗板:弃去孔中液体，加入1xWash Buffer(300uL/孔)洗板五次，拍干酶标板。

6.检测抗体孵育:将 1x 检测抗体加入酶标板中，100 uL/孔，37℃静置孵育1h。

7.洗板:弃去孔中液体，加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次，拍干酶标板。

8.酶结合物孵育:将 1x 酶结合物加入酶标板中，100 μL/孔，37℃静置孵育 40 min。

9.洗板:弃去孔中液体，加入1xWash Buffer(300 uL/孔)洗板五次，拍干酶标板。
10.显色:使用前的10 min 将底物液恢复至室温(18~25°℃)，将底物液TMB加入酶标板中，100 uL/孔，37℃避光孵育 15

mine

11.终止:加入 50 uL/孔终止液至酶标板中，轻轻震动酶标板至显色均匀。

12.读值:20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长，630nm 作为参比波长。

结果处理

1. 标准曲线OD处理（见下例，仅为示例，具体以实际测定为准）

2. 标准品理论浓度与对应 OD 值以四参数进行拟合，得到标准曲线(如下图所示)。

注意事项

1.样品首i次检测，建议进行至少3个连续倍数的稀释，以在标准曲线范围内产生至少一个稀释后样品。

2.试剂按标签说明储存，使用前室温(18~25℃℃)平衡。3.包被酶标板使用前，请平衡至室温(18~25°C)再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中密封，4℃可保存一个月。其余不用试剂应包装好或盖好。

4.实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

5.使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。

6.洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸中上充分拍干，直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。

7.底物显色液对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免与金属接触影响结果。

8.本产品为一次性使用的试剂盒，请在效期内使用。

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