BlueKit®系列BlueKit系列CHO HCP ELISA检测试剂盒是用于定量检测CHO细胞来源的宿主蛋白残留的专用试剂盒。柏莱源生物为谱新生物代理商,有关价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号:HG-HCP003
产品简介:
BlueKit系列系列蛋白A(Protein A)ELISA检测试剂盒是用于定量检测生物制品中蛋白A残留量的专用试剂盒。
本试剂盒采用双抗夹心法,用捕获抗体包被96孔酶标板,制成固相抗体,随后加入标准品和检测样品,再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的酶标抗体,形成一个固相抗体-蛋白A-酶标抗体的三明治结合物,反应结束后洗涤,然后加入底物进行显色反应,底物在HRP的催化下由无色转变成蓝色,并在终止液的作用下转变成最终的黄色。在450nm和630nm波长下测定其吸光度值(OD值),其中630nm为校正波长。OD值与样品中的蛋白A含量呈正相关。
检测范围:1.56-100 ng/mL
定量限:1.56 ng/mL
96T
适用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。
组分 | 规格 | 配制 |
CHO-K1 HCP标准品(5μg/mL) | 100μL×1管 | 用稀释液1进行梯度稀释 |
包被酶标板Coated Plate | 8孔×12条 | 即用型 |
稀释液1 Dilution Buffer 1 | 50mL×1瓶 | 即用型 |
稀释液2 Dilution Buffer 2 | 30mL×1瓶 | 即用型 |
浓缩洗液Wash Buffer(20×) | 50 mL×1瓶 | 用超纯水进行20倍稀释 |
检测抗体Detection Antibody(50×) | 300μL×1管 | 用稀释液2进行50倍稀释 |
酶结合物Streptavidin-HRP(100×) | 300μL×1管 | 用稀释液2进行100倍稀释 |
TMB显色液TMB Substrate | 12 mL×1瓶 | 即用型 |
终止液Stop Solution | 10 mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜Sealing film | 5张 | 即用型 |
说明书 | 1份 | 即用型 |
◆酶标仪
◆去离子水
◆微孔板恒温振荡器
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
实验前准备
1.所有试剂以及待测样本需要恢复室温(18-25℃)。所有试剂现配现用。
2.1× 洗液配制:浓缩洗液平衡至室温(18-25℃),不要有结晶。混匀后根据用量,取适量用超纯水按 1:19 的比例,将20× 洗液稀释 20 倍,最终得到 1×洗液。
3.1x 检测抗体配制:50× 检测抗体充分溶解后,离心,然后用稀释液 2 以 1:49 的比例进行稀释。备注:若需同时使用多瓶校准品,请分别溶解后转移至 1.5 mL 无菌离心管,振荡混匀后使用;若每瓶校准品复溶液涉及多次冻融,建议采用 1.5 mL 无菌离心管酌量分装后在≤ -18 ℃保存。
4.1× 酶结合物配制:100× 酶结合物充分溶解后,离心,然后用然后用稀释液 2 以 1:99 的比例进行稀释。
备注:取出浓缩缓冲液(10×)和稀释液,观察如有结晶属正常现象,于 37 ℃温育直至完-全溶解。
5. 标准品的配制:准备 8 个 1.5mL 离心管,按照标准品浓度依次标记。取 12 微升标准品和 588μL 稀释液 1 分别加入第 1 个离心管,混匀即为ST1(100ng/mL),剩下7个离心管分别加入300μL稀释液1,再按下图进行梯度稀释。
操作步骤
1.清洗酶标板:用 1× 洗液(300μL/ 孔)洗板三次,拍干。
2.孵育样本:对应加入标准品和待测样本,100μL/ 孔,37℃孵育 1h。
3.清洗酶标板:弃去孔中液体,加入 1× 洗液(300μL/ 孔),洗板五次,拍干。
4.检测抗体孵育:将配制好的 1×检测抗体加入到孔中,100μL/ 孔,37℃孵育 1h。
5.清洗酶标板:弃去孔中液体,加入 1× 洗液(300μL/ 孔),洗板五次,拍干。
6.酶结合物孵育:将配制好的 1×酶结合物加入到孔中,100μL/ 孔,37℃孵育 40min。
7.清洗酶标板:弃去孔中液体,加入 1× 洗液(300μL/ 孔),洗板五次,拍干。
8.显色:使用前的10min 将显色液恢复至室温,每孔加入 100μL,37℃避光孵育 15min。
9.终止:每孔加入 50μL 终止液,轻轻摇动酶标板至显色均匀。
10.上机:10min 内上酶标仪,读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值(450nm 为检测波长,630nm 为参比波长)。
结果处理
1.标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)
标准品浓度(ng/mL) | OD(1) | OD(2) | 平均值 |
100 | 2.7547 | 2.7934 | 2.7741 |
50 | 1.9245 | 1.924 | 1.9243 |
25 | 1.2892 | 1.2889 | 1.2891 |
12.5 | 0.8784 | 0.8985 | 0.8885 |
6.25 | 0.5444 | 0.5538 | 0.5491 |
3.125 | 0.3405 | 0.3385 | 0.3395 |
1.5625 | 0.2268 | 0.2322 | 0.2295 |
0.00 | 0.1229 | 0.1271 | 0.1250 |
0.00 | 0.1229 | 0.1271 | 0.1250 |
2. 以标准品理论浓度与对应OD值进行四参数拟合,得到标准曲线(如下图所示)
1. 试剂应按标签说明储存,使用前室温(18-25℃)平衡。
2. 预包被板条使用前,请平衡至室温(18-25℃)再打开外包装袋,实验中不用的板条应立即放回包装中密闭封口, 4℃可保存一个月。其余不用试剂应包装好或盖好。
3. 标准品、生物-素及酶结合物体积量很小,使用前请短暂离心,以使管壁或管盖的液体沉积到管底。
4. 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5. 使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6. 洗涤过程中反应孔中残留的洗液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。
7. 底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8. 本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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