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产品简介
BlueKit系列CHO 残留DNA检测试剂盒是用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中CHO宿主细胞DNA残留量的专用试剂盒。柏莱源生物为谱新生物代理商，有关价格与技术问题等信息咨询，请联系我们！
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货号：HG-CH001
产品简介：
CHO 残留 DNA 检测试剂盒是用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中 CHO 宿主细胞, DNA 残留量的专用试剂盒。本试剂盒利用TaqMan 荧光探针原理，定量检测样本中 CHO 残留 DNA。检测快速，专一性强，性能可靠，最-低检测限可以达到fg水平。
试剂盒配套的 CHO DNA 定量参考品，已溯源至国家标准品。
检测范围：3 fg/μL ~ 3×105 fg/μL
100 Reactions
| 组分 | 规格 | 存储条件 |
| CHO DNA定量参考品(30ng/μL) | 50μL×1管 | -20℃ |
| CHO Primer&Probe Mix | 550μL×1管 | |
| 2x qPCR Reaction Buffer | 1.6mL×1管 | |
| DNA稀释液 | 1.5m×3管 |
◆ ABI PRISM 7500
◆ FQD-96A（博日）
◆ CFX96(Bio-Rad)
◆ Roche Light Cycler 480
实验前请准备好下列耗材与设备：
◆1.5mL或2mL无菌低吸附离心管
◆ 与PCR仪适配的96孔qPCR板或八联排管
◆ 1000μL，200μL，10μL无菌低吸附带滤芯枪头
◆ 荧光定量PCR仪
◆ 水浴锅/金属浴
◆ 离心机
◆ 震荡器
◆ 各规格移液器（如1000μL，200μL，10μL，2.5μL等）
◆ 磁力架
详见样品前处理试剂盒（货号为HG-CL100）操作说明书。
1. 定量参考品及NCS、NTC的制备
1.1 定量参考品：取出 CHO DNA 定量参考品、DNA 稀释液置于冰上融化；待完-全融化后，轻微振荡混匀，瞬时离心；
1.2 取 7 支干净的 1.5mL 离心管，分别标记为 ST0，ST1，ST2，ST3，ST4，ST5，ST6；
1.3 标准品稀释过程如下表：
| 标准品代号 | 稀释体积 | 浓度(fg/μL) |
| ST0 | 10μL CHO DNA定量参考品+90μL DNA稀释液 | 3×10⁶ |
| ST1 | 10μL STO+90μL DNA稀释液 | 3×10⁵ |
| ST2 | 10μL ST1+90μL DNA稀释液 | 3×10⁴ |
| ST3 | 10μL ST2+90μL DNA稀释液 | 3×10³ |
| ST4 | 10μL ST3+90μL DNA稀释液 | 3×10² |
| ST5 | 10μL ST4+90μL DNA稀释液 | 3×10¹ |
| ST6 | 10μL ST5+90μL DNA稀释液 | 3×100 |
2. q-PCR 反应液的制备和加样
2.1 根据所需检测的标准样品和待测样品数量（一般做3个复孔），计算所需孔数：
反应孔数 =（6 个浓度梯度的标曲 +2 个阴性对照 NTC 和 NCS + 待测样品）×3
2.2 根据反应孔数计算本次所需的 qPCR Mix 总量：
qPCR Mix =（反应孔数 +2 或 3）× 20μL（2 或 3 为操作损失量）
2.3 将所需试剂置于冰上融化，轻微振荡混匀，按表 2 所示配制制 qPCR Mix。
| 组分 | 单孔反应(μL) |
| 2× qPCR buffer | 15 |
| CHO Primer&Probe Mix | 5 |
| 总体积 | 20 |
qPCR Mix 配制表
3. 将所需试剂置于冰上融化，轻微振荡混匀，按下表所示加样（总体积30μL）：
| 参考品 | 20μL qPCR Mix +10μL ST1/2/3/4/5/6 |
| 阴性对照 | 20μL qPCR Mix +10μL NTC/NCS |
| 待测样品 | 20μL qPCR Mix +10μL 待测样本 |
各反应孔加样示例
4.实验需使用qPCR实验专用的八联管或者96孔板进行反应，需去除反应体系中的气泡，并离心将液体离至管底准备反应。
5.反应孔排版示例
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A | ST1 | ST1 | ST1 | S1 | S1 | S1 | ||||||
| B | ST2 | ST2 | ST2 | S2 | S2 | S2 | ||||||
| C | ST3 | ST3 | ST3 | S3 | S3 | S3 | ||||||
| D | ST4 | ST4 | ST4 | |||||||||
| E | ST5 | ST5 | ST5 | |||||||||
| F | ST6 | ST6 | ST6 | ERC -S1 | ERC -S1 | ERC -S1 | ||||||
| G | NTC | NTC | NTC | ERC -S2 | ERC -S2 | ERC -S2 | ||||||
| H | NCS | NCS | NCS | ERC -S3 | ERC -S3 | ERC -S3 |
96孔板排版示例
（以BIO-RAD公司CFX96 qPCR仪为例。）
1.创建实验反应程序，设置两步法反应程序如下表：
| Stage1 | 污染消化 | Reps:1 | 50℃ | 2min |
| Stage2 | 预变性 | Reps:1 | 95℃ | 20s |
| Stage3 | 循环反应 | Reps:40 | 95℃ | 3s |
| 60℃ | 30s |
2.创建实验反应板，点击 Select Fluorophores 选择荧光 FAM；在反应板图表中，选择样品孔，在 Sample Type 中下拉选择Unknow，勾选荧光 FAM，Target Name 命名为 CHO-DNA；输入每个样品的重复次数及 Sample Name。( 备注：如仪器要求设置猝灭基团与参比荧光：猝灭基团为 None，参比荧光为 ROX。)
3.在反应板图表中，选择标曲孔，在 Sample Type 中下拉选择 Standard，勾选荧光 FAM，Target Name 命名为 CHODNA；输入每个稀释梯度的重复次数及 Sample Name。分别在 ST1、ST2、ST3、ST4、ST5、ST6 的 Concentration 一栏赋值为3.00E+05、3.00E+04、3.00E+03、3.00E+02、3.00E+01、3.00E+00（单位为 fg/μL）。
4.点击Run界面“Start Run"按钮进行PCR测定。
以BIO-RAD公司CFX96 qPCR仪为例
1. 点击资料分析视窗Quantitation，可读取标准曲线的斜率（Slope）、截距（Intercept）、扩增效率（Effect）、R2。
2. 在视窗Quantitation Data 中，SQ Mean 一栏可读取无模板对照NTC、NCS、待测样本的检测值，单位为fg/μL。
3. 数据可靠性评估：
• 三个平行孔间Ct值差应小于1.0，Ct值大于35的孔除外；
• 阴性对照 NTC 和 NCS 的 CT 值都应大于标曲最-低浓度的 CT 值或根据实验室自身验证结果设定标准；
• 标准曲线线性相关系数R2≥0.98，扩增效率85%~110%之间；
• ERC 回收率在 50%~150% 之间（加标回收率 =ERC/(0.9* 样品 +0.1*ST3)。
1. 本试剂盒已通过稳定性（冻融等因素）的验证，无需分装。
2. 阴性样品和阳性样品（参考品和待测样品等）的配制环境需区分区域，不可在一个区域内操作，配制人员需穿戴整齐，戴好口罩、手套和穿好洁净服。
3. 注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染，避免长时开盖。
4. 试剂盒必须在有效期内使用。
5. 试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用。
6. 只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证优良检测效果。
7. 尽量在当天完成样本前处理纯化后立即进行后续qPCR检测，以保证检测结果的准确性。
8. 最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。
9. 公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
10. 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。
CHO 残留DNA检测试剂盒产品订购，请联系柏莱源（天津）生物科技有限公司！
柏莱源（天津）生物科技有限公司的优势：
现货供应：公司库存充足，可快速发货，减少用户等待时间。
效期保障：严格把控产品质量，确保试剂效期新鲜，保障实验结果的可靠性。
专业技术支持：提供详细的实验方案和技术指导，帮助用户优化实验条件，提高实验成功率。
定制化服务：根据用户需求，提供个性化的产品和服务解决方案。
售后保障：完善的售后服务体系，及时解决用户在使用过程中遇到的问题。
CHO 残留DNA检测试剂盒：柏莱源（天津）生物科技有限公司，更多产品资讯，请联系我们哦！
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