ELISA实验的具体步骤

酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。ELISA是分子生物学、免疫学和细胞生物学研究中常用到的实验操作之一，一起来了解一下ELISA实验的具体步骤吧！1.涂覆：将待检测的抗原或抗体溶液加入到微孔板（通常是96孔板）中，并在孔板表面上形成一层固定的抗原或抗体。这个过程被称为涂覆。2.阻断：为了防止非特异性结合，需要在...

怎么选择瞬时转染和稳定转染呢？

转染是将外源性核酸（DNA或RNA）采用各种化学、生物学或物理方法导入细胞，从而实现对细胞基因功能的蛋白质表达研究。生成重组蛋白，或特异性地增强或抑制转染细胞中的基因表达是转染实验的主要目的。因此，转染是一种功能强大的分析工具，可用于基因或基因产物的功能和调控研究，用于生成转基因生物，并可用作基因治疗方法。常规的转染技术主要分为瞬时转染和稳定转染，怎么选择瞬时转染和稳定转染呢？选择瞬时转染还是稳定转染，具体取决于您要开展的实验的时间范围和最终目标。瞬时转染细胞一般在转染后24...

如何利用PEI转染细胞呢？

转染细胞的方法有很多，这里介绍一种比较经济实用的转染试剂--聚乙烯亚胺(即PEI)。PEI（polyethylenimine）是一种带有高电荷阳离子的多聚物，非常容易结合带负电荷的DNA分子，形成复合物，并转染到贴壁和悬浮细胞中，常用于大规模瞬时转染表达。在HEK293和CHO等细胞中转染效率较高。那么如何利用PEI转染细胞呢？实验前准备：PEI(polysciences,Cat#:24765-1),将PEI配置成1ug/ml，用0.2μm滤膜过滤，并分装储存于负80度。实验...

免疫共沉淀Co-IP实验步骤

Co-IP（免疫共沉淀，co-inmunoprecipitation）是经典的利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体的一项技术，能够特异性富集所研究的目的蛋白。免疫共沉淀Co-IP实验步骤细胞转染1.铺细胞，转染细胞。本次转染的两个蛋白分别带有FLAG和HA标签。裂解细胞2.去除培养基，PBS吹下细胞，离心去上清。将细胞沉淀转移到1.5mlEP管中，PBS洗，离心去上清，加1ml裂解液。3.冰上孵育40min，每10min震荡一次。4.超声破碎细胞结构和打断染色质。冰...

Lipo3000转染细胞的步骤及注意事项

关于细胞转染，有许多常用的转染试剂。下面简单介绍下Lipo3000转染细胞的步骤及注意事项。实验准备：Lipofectamine™3000转染试剂、Opti-MEM（可以用无血清的培养基代替）实验步骤：1.接种细胞，使其在转染时达到70–90%汇合度。注：对于HEK293，6孔板一般铺50万个细胞左右。对于PC9,24孔板一般铺5-10万个细胞。由于不同细胞，生长状况不太一样，需要根据情况调整。2.使用Opti-MEM™培养基稀释Lipofectami...

启动子有哪些特征？

启动子是一段位于结构基因5’-端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地结合，并具有转录起始的特异性。基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效地形成二元复合物。那启动子有哪些特征？①序列特异性。在启动子的DNA序列中，通常含有几个保守的序列框，序列框中碱基的变化会导致转录启动活性的改变。②方向性。启动子是一种有方向性的顺式调控元件，有单向启动子和双向启动子两类。③位置特性。启动子一般位于所启动转录基因的上游或基因内的前端。处于基因的下游或在基因的上游但离...

PCR体系及各类常见PCR辨析

聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction)简称PCR，是一种体外高效扩增特定DNA片段的分子生物学技术。该技术的发明人是KaryMullis，他从1983年开始研究PCR技术，1985年开始被逐渐采用，成为分子生物学的一项常规手段，并得到了广泛的应用，在临床诊断、生物医学研究和法医学领域都具有重要意义。PCR是在体外模拟体内DNA复制的过程，它用加热的办法让需要扩增的DNA片段变性解链成两条单链，人工合成的一对引物让它们结合到DNA模板（分别结合到两条链上...

常用于转染的细胞类型

转染，顾名思义，是指将某种物质转移到细胞内，是分子生物学和细胞生物学研究的重要技术。在生物医学研究中，这个“物质”通常指的是DNA或RNA。通过转染，我们可以向细胞引入新的基因，或者沉默或敲低细胞内的某个基因，从而进行基因功能研究、基因表达调控，或是进行基因治疗等。在实验过程中，选择哪种细胞受体也有一定要求，本期我们就来了解一下常用于转染的细胞类型有哪些吧？常用于转染的细胞包括原代细胞、原代细胞衍生物、肿瘤细胞系、幼仓鼠肾细胞（BHK-21）、人胚肾细胞（HEK-293）、人...