BlueKit系列人干扰素 γ(IFN-γ)ELISA 检测试剂盒采用双抗夹心法,用于定量检测血清、血浆或细胞上清中人IFN-γ 蛋白的含量。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号: HG-IF002
BlueKit® 系列人干扰素 Y(IFN-Y)ELISA检测试剂盒采用双抗夹心法,用于定量检测血清、血浆或细胞上清中人IFN-γ蛋白的含量。将特异性抗人IFN-γ单克隆抗体包被在微孔板上,反应孔内加入标准品、待测样本、检测抗体,室温(18-25°C)孵育,洗涤后再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤后加入显色液 TMB。颜色反应的深浅与目标蛋白浓度成正比。
检测范围:4.69-300 pg/mL
灵 敏 度:0.36 pg/mL
精密度:CV%≤10%,RE%<±15%
96T
适用于血清、血浆、细胞培养上清及其他生物学样本中人 IFN-γ 蛋白含量测定。
组分 | 规格 | 配制 |
包被酶标板(Coated Plate,CP) | 8孔x12条 | 即用型 |
人IFN-γ标准品(Human IFN-γ Standard,S) | 300μLx1管(10000pg/mL) | 用样品稀释液按比例稀释 |
样品稀释液(Sample Diluent, SD) | 15mL×1 管 | 即用型 |
检测抗体(Detect Antibody,DA) | 6mL×1 管 | 即用型 |
酶结合物(Streptavidin-HRP, SH) | 12mL×1 管 | 即用型 |
检测缓冲液(Assay Buffer,AB) | 12mL×1 管 | 即用型 |
10×洗液(10x Wash Buffer, WB) | 50mL×1 管 | 1:9用去离子水稀释 |
显色液(TMB Substrate,TS) | 12mLx1 管 | 即用型 |
终止液(Stop Solution,SS) | 12mLx1 管 | 即用型 |
封板膜(Sealer film,SF) | 5 张 | 即用型 |
说明书(Instruction For Use,IFU) | 1 份 | 即用型 |
备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃,有效期12个月。
◆酶标仪
◆去离子水
◆微孔板恒温振荡器
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
试剂配制
1x洗液根据实际用量,取适量10x浓缩洗液用去离子水 10 倍稀释)
标准曲线的制作
人IFN-γ 标准品S 3000pg/mL 40μL+360 μLSD 稀释后作为高标准(300pg/mL)。每个稀释试管中加入200μLSD,使用高标准制备1:1稀释系列。在进行下一步转移之前彻i底混合每个试管。SD用作零标准(0pg/mL)。
操作步骤
检测之前请将所有的试剂、样本恢复至室温(18-25℃)。
1. 准备好所有需要的试剂及工作浓度标准品。
2. 将不需要的板条拆卸下来,放回铝箔袋,重新封好封口。
3. 每孔加入50μL检测缓冲液(AB)。
4. 加入50μL的标准品(S)、样本。保证连续加样,请不要间断。加样过程在15分钟内完成。
5. 每孔加入50μL检测抗体(DA)。
6. 使用封板膜封板。500转/分钟振荡,25℃孵育1小时。
7. 弃掉孔内液体,每孔加入300μL洗液洗板,洗涤4次。每次洗板,在吸水纸上拍干。为获得理想的实验性能,必须彻i底移除残留液体。
8.加入100μL酶结合物(SH)。
9.使用新的封板膜封板。500转/分钟振荡,室温(18-25℃)孵育30分钟。
10.重复步骤7。
11.每孔加入100μL显色液,避光室温(18-25℃)孵育10-15分钟。
12.每孔加入100μL终止液。
13. 20 min 内读取 450nm/630nm 波长处的吸光度值。450nm 作为检测波长,630nm 作为参比波长。
结果处理
1. 标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)
标准品浓度(pg/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
300.00 | 4.0655 | 4.0291 | 4.0473 |
150.00 | 3.1760 | 3.2300 | 3.2030 |
75.00 | 2.1280 | 2.1770 | 2.1525 |
37.50 | 1.2630 | 1.2960 | 1.2795 |
18.75 | 0.6812 | 0.7103 | 0.6958 |
9.38 | 0.3773 | 0.3778 | 0.3776 |
4.69 | 0.1919 | 0.2089 | 0.2004 |
0.00 | 0.0218 | 0.0220 | 0.0219 |
2. 以标准品理论浓度与对应OD值取1og后进行直线拟合,得到标准曲线(如下图所示)
1. 样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标准曲线范围内产生至少一个稀释后样品。
2. 试剂按标签说明储存,使用前室温(18-25℃)平衡。
3. 包被酶标板使用前,请平衡至室温(18-25℃)再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其余不用试剂应包装好或盖好。
4. 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5. 使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6. 洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。
7. 底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8. 本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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