货号： HG-NA100

产品简介：

本试剂盒用于核酸的提取、富集、纯化等步骤，其处理后的产物可用于临床体外检测使用。

本试剂盒使用超顺磁性微球可以特异性的吸附 DNA，通过洗涤去除 DNA 以外的蛋白质等杂质。洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA，分离纯化得到高质量核酸。

规格：

100 人份

产品组成：

产品储存条件与有限期：

2-8℃下有效期为 24 个月。

适用仪器：

本试剂盒适用于 BIO-DL32, TIANGEN TGuide S32, TIAN LONG NP968 -C 等自动化核酸提取仪，也适用于手动提取。

样本要求：

新鲜或冷冻的抗凝处理的人全血样品、组织及细胞。

使用方法：

首i次使用前： 

（1）在洗涤液 I ③中缓慢加入指i定量（见瓶身标签）的异丙醇（分析纯，需客户自备），并于“□"内打上“√"，混匀后2~8℃保存。 

（2）在蛋白酶 K 干粉 ⑤ 中加入指i定量（见管身标签）的溶液 A ⑥，并于“□"内打上“√"，混匀后保存于 2~8℃，或分装后保存于 -20℃。

一、手动操作流程

1. 客户自备物品：

◆ 异丙醇（分析纯） 

◆ 漩涡振荡器 

◆ 80% 乙醇 

◆ 垂直混合仪 

◆ 1.5mL 离心管：2 个 / 样品 

◆ 恒温金属浴 (Dry Bath Incubator, Cat.:2016C) 或水浴锅 (55℃ ) 

◆ 单通道移液器：20μL、200μL、1000μL 

◆ 磁性分离器

2. 操作步骤

（1） 裂解 

取一个新的 1.5mL 离心管，加入 200μL 的抗凝血液样品、组织或细胞（ 细胞取 1.0-1.5E6 cells 进行提取），具体可根据实验调整（不足 200μL 时可用 PBS 或洗脱液④补足），再分别加入 10μL 的蛋白酶 K ⑤（检查是否已加入溶液 A ⑥）和230μL 的裂解液②，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡 10s 后，置于 55℃条件下反应 5min。

（2） 结合 

加入 320μL 的异丙醇和 20μL 的磁珠悬液①，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡 10min（或漩涡震荡 10s 后置于垂直混合仪上反应 10min）。快速离心 3s 后，然后将离心管置于磁性分离器上放置 2min，用移液器移去上清液并取下离心管。注意：此步骤的磁性分离时间应不少于 2 min。

（3） 洗涤 

①  加入 600μL 洗涤液 I ③（检查是否已加入异丙醇），以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡至少 1min，使磁珠充分重悬，快速离心 3s 后，再将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，移去上清液并取下离心管。重复该步骤一次。 

②  加入 600μL80% 乙醇，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡至少 1min，使磁珠充分重悬，快速离心 3s 后，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，移去上清液并取下离心管。重复该步骤一次。 

注意：最后一步洗涤应尽量除尽洗涤液。

（4） 干燥

保持离心管于磁性分离器上，于室温下静置 10min 后，即磁珠表面无明显光泽，取下离心管。 

注：干燥过程中若发现反应管中有液体残留时，可用小量程移液器吸弃液体。

（5） 洗脱

加入 100~200μL 洗脱液④，涡旋震荡，或用移液器缓慢吹打磁珠，使磁珠充分重悬。然后于 55℃条件下加热 5min，快速离心 3s 后，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，转移上清液至新的 1.5mL 离心管中，此即为纯化得到的基因组DNA，可保存于 -20℃。

二、自动化操作流程

1. 客户自备物品：

◆ 磁棒式自动化核酸提取仪（BIO-DL 32， TIANGEN TGuide S32， TIANLONG NP968 -C 等） 

◆ 异丙醇（分析纯） 

◆ 80% 乙醇 

◆ 96 孔磁棒套 2 个 

◆ 1.5 mL 离心管：2 个 / 样品 

◆ 96 孔深孔板 1 个 

◆ 单通道移液器：20μL、200μL、1000μL

2. 操作步骤

（1）在 96 孔深孔板第 1 列和第 7 列依次加入 10μL 蛋白酶 K（检查 是否已经加入溶液 A），200μL 样本，230μL 裂解液和 320μL 异丙醇 。 

（2）在第 2 列和第 8 列加入 600μL 洗涤液 I（检查是否已加入异丙醇）和 20μL 磁珠悬液。 

（3）在第 3 列和第 9 列加入 600μL 洗涤液 I（检查是否已加入异丙醇）。 

（4）在第 4 列和第 10 列加入 600μL80% 乙醇。 

（5）在第 5 列和第 11 列加入 600μL80% 乙醇。 

（6）在第 6 列和第 12 列加入 100~200μL 洗脱液。

注意：第 1 列和第 7 列试剂加入时按照以下顺序加入，先加入 10μL 蛋白酶 K，再加入 200μL 样本，然后加入 230μL 裂解液，最后加入 320μL 异丙醇。（若试剂加入顺序不对，可能导致核酸提取浓度及纯度偏低。）

（7）自动化核酸提取仪提取参数设置建议：

注意事项：

1. 操作之前，请务必认真阅读本产品手册。

2. 血液样品的质量对产物 DNA 的纯化量有较大影响，应避免反复冻融血液样品。 

3. 蛋白酶 K 干粉溶解后，可分装储存于 -20℃，但应避免反复冻融。 

4. 应避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。 

5. 磁珠取用前应充分重悬均匀。 

6. 磁珠干燥前，应使用移液器吸尽洗涤液。 

7. 应避免磁珠过度干燥，否则会严重降低核酸洗脱效率。 

8. 建议使用质量较好的离心管和移液器吸头，避免因粘附磁珠而造成损失。 

9. 在 96 孔板中进行磁性分离操作时，磁珠吸附时间可适当延长。

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