AAT Bioquest品牌：细胞膜荧光探针介绍

美国AAT Bioquest公司

前身是ABD Bioquest，Inc. 简称AATbio，是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家提供研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。

AAT Bioquest产品系列

1、用于标记小药物分子和生物聚合物（如蛋白质，核酸和碳水化合物）的反应荧光和发光探针，生物素和标签酶

2、用于检测蛋白质，核酸和活细胞的荧光和发光探针

3、用于检测多种酶的荧光和发光探针，特别是水解和氧化还原酶

4、开发用于信号转导研究的试剂

5、生理和神经学探针，如钙指示剂和膜电位探针

AAT Bioquest产品列表

关于荧光染料：   

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一类亲脂性荧光染料家族，用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子结合时，其荧光强度显著增强。它们具有很高的淬灭系数，偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，导致在其最佳浓度条件下，将整个细胞染色。

荧光颜色

DiI（橙色 ）   DiO（绿色）

DiD（红色 ）  DiR（深红）

这些颜色为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI可以分别与标准的FITC和TRITC滤光器一同使用，其中，DiO可以被633 nm He-Ne激光激发，并且具有比DiI更长的激发和发射光波长，为标记细胞和组织的那些本身就具有本底荧光的染料提供了非常优质的替代品。

使用方法：

1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS细胞膜染色液制备

  (1) 配置DMSO或EtOH 储存液：

      储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。

      注意：未使用的储存液保存在-20℃，避免反复冻融

  (2) 工作液制备：

      用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)

      稀释储存液，配制浓度为1～5 µM的工作液。

     注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。

2. 悬浮细胞染色

  (1) 悬浮细胞密度为 1 × 106/mL加入到工作液中。

  (2) 37℃培养细胞 2～20分钟，

       不同的细胞最佳培养时间不同。

  (3) 1000～1500转离心5分钟。

  (4) 倾倒上清液，再次缓慢加入预温37的培养液。

  (5) 重复(3)，(4)步骤两次以上。

3. 粘壁细胞的染色

  (1)使粘壁的细胞在无菌实验室培养。

  (2)从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

  (3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

  (4)在37 培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

  (5)吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

4. 流式细胞仪的检测

  DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。

柏莱源（天津）科技有限公司为广大科研用户提供AAT Bioquest品牌的全线产品