货号： HG-TR001

产品简介：

本试剂盒采用双抗体夹心法原理，并偶联生物i素 - 链霉亲和素系统。酶标板微孔中包被抗胰yi蛋白酶抗体，加入样本后孵育洗涤，再加入生物i素化检测抗体孵育，形成抗体- 抗原 -抗体复合物，再次洗涤后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素（streptavidin， SA）。经过彻i底洗涤后加底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，经酸的终止作用转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中胰yi蛋白酶含量呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），根据标准曲线计算样品中胰yi蛋白酶浓度。

检测范围：0.039~2.5 ng/mL
检  测  限：0.003ng/mL
定  量  限：0.039ng/mL
精  密  度：CV% ≤ 10%
回  收  率：80%~120%

规格：

96 T

应用：

适用于定量检测样本中胰yi蛋白酶的含量。

产品组成：

备注：试剂盒保存温度为2~8℃ 。

产品储存条件与有限期：

未开封的试剂盒， 2-8℃条件下有效期为12个月。

材料准备：

（1）酶标仪
（2）酶标板恒温振荡器
（3）移液器及一次性吸头（0.5-10µL,10 -100µL,30-300µL,100-1000µL）

（4）去离子水 

（5）吸水纸 

（6）EP 管

实验前准备准备：

（1）将试剂盒平衡至室温（18~25°C）。
（2）20×浓缩洗涤液用纯化水按1：19 体积比稀释成洗涤工作液。
（3）100×生物i素化检测抗体和100×HRP-链霉亲和素在使用前i10-15min 用稀释液作100倍稀释并平衡至室温后使用。
（4）标准品用稀释液稀释至2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.3125ng/mL、0.156ng/mL、0.078ng/mL、0.039ng/ mL、0ng/mL。

操作步骤：

（1）从室温平衡后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条加盖封板膜后用自封袋密封放回2~8℃。 

（2）设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加入不同浓度的标准品100μL，样本孔中加入待测样本100μL。500μL稀释液0（ng/mL）    

 * 当不能够确定待测样品中的胰yi蛋白酶含量时，应当用稀释液做多个稀释倍数做检测，以免含量过高不能够读取有效数值。 

（3）用封板膜封住反应孔， 室温（18~25℃）下振板(500rpm)反应60min。 

（4）弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(300μL)，静置30s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次。 

（5）标准品孔和样本孔中每孔加入工作浓度的生物i素化检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，室温（18~25℃）下振板(500rpm) 反应60min。

（6）弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(300μL)，静置30s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次。 

（7）标准品孔和样本孔中每孔加入工作浓度的HRP-链霉亲和素100μL，用封板膜封住反应孔，室温（18~25℃）下振板(500rpm）反应30min。 

（8）弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(300μL)，静置30s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次。 

（9）每孔加入单组分底物显色液100μL，用封板膜封住反应孔，37℃静置避光反应10min。 

（10）每孔加入终止液50μL，立即进行检测，设定酶标仪波长于450nm 处(建议用双波长450nm/650nm）。

标准曲线：

实验检测结果：

注意事项：

（1）显色温度和时间对实验结果至关重要，应准确把握。 

（2）洗涤过程中应使洗涤液浸泡反应板30s 后再甩干，以充分洗涤非特异性吸附的成分。 

（3）所有试剂使用前应充分摇匀，加样时应将所加样物加入酶标板孔中底部，避免加在孔壁上部，加样时注意不可溅出，不可产生气泡。 

（4）若发现浓缩洗涤液中有结晶，可在37℃水浴锅中孵育，待结晶完i全溶解后再混匀稀释至工作浓度。 

（5）样本中应避免引入叠氮i化钠(NaN3），叠氮i化钠会破坏辣根过氧化酶活性，使检测值偏低。 

（6）实验前请先将抗体管和HRP-链霉亲和素管1000 rpm离心30s，以避免管壁及管盖上残留试剂。

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