293T HCP ELISA 检测试剂盒说明书
货号:HG-HCP001

本试剂仅用于检测样本中293T HCP组分的含量。
产品简介:
本品采用双抗夹心法检测样本中293T HCP含量,将293T抗体预包被在微孔板上,将标准品与待测样本加入到已包被的反应孔内进行孵育。存在的293T蛋白会定量的与微孔板中的抗体结合,洗涤除去未结合物,加入生物i素标记的抗293T蛋白抗体,最后加入亲和素标记HRP,形成抗体-抗原-生物i素抗体-酶标亲和素复合物,通过TMB显色程度指示样品中蛋白含量。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分。
检测范围: 37-27000 ng/mL
定 量 限: 37ng/mL
精 密 度: CV%≤10%, RE%≤±15%
规格:
96 T
应用:
本试剂盒采用双抗夹心法定量分析以293T为表达细胞的生物药中宿主蛋白杂质,可检测293T宿主蛋白杂质所需要的全部组分。
产品组成:
组分 | 规格 | 配制 |
---|
293T HCP Coated Plate(包被酶标板) | 8孔×12条 | 即用型 |
Anti- 293T HCP -Biotin(检测抗体 100×) | 150μL×1管 | 1:99用稀释缓冲液稀释 |
Streptavidin HRP( 酶结合物 10×) | 375μL×3管 | 1:9用稀释缓冲液稀释 |
293T HCP Standard(标准品) | 600μL×1管(81ug/mL) | 按建议稀释方式操作 |
Diluent Buffer (稀释液) | 1g×1瓶 | 用 1×PBS-T 现配现用(1g/100ml) |
10×PBS-T Wash Buffer (10×PBS-T洗液) | 50mL×1瓶 | 1:9用去离子水稀释 |
TMB Substrate(显色液) | 15mL×1瓶 | 即用型 |
Stop Solution(终止液) | 15mL×1瓶 | 即用型 |
封板膜 | 5张 | 即用型 |
说明书 | 1份 | 即用型 |
产品储存条件与有限期:
2~8℃避光保存,有效期8个月。
需要准备材料:
◆ 酶标仪
◆ 去离子水
◆ 微孔板恒温振荡器
◆ 全新滤纸
◆ 微量加液器及吸头
◆ 涡旋振荡器
试剂配制:
1.平衡: 将所需试剂移到室温(18~25℃)平衡30分钟。
2.配液:
➀1×PBS-T 洗涤液:计算实验所需工作液体积,取适量 10×PBS-T 洗液,用去离子水进行 10 倍稀释,混匀后备用;
➁稀释液工作溶液:根据实验需求取适量稀释液干粉按(1g/100mL)的比例,用 1× PBS-T 溶解混匀,也可一次性稀释后分装,放置 -20 ℃保存。避免稀释液反复冻融。
③检测抗体工作液:计算实验所需工作液体积,取适量生物i素抗体用稀释液进行100倍稀释,充分混匀备用;
④酶结合物工作液:计算实验所需工作液体积,取适量酶结合物用稀释液进行10倍稀释,充分混匀备用;
⑤标准品及样品使用稀释液进行稀释。
3.标准品稀释:
管号 | 标准液浓度 (ng/mL) | 标准液体积 (μL) | 稀释液体积 (μL) | 总体积 (μL) | 终浓度 (ng/mL) | 剩余体积 (μL) |
8 | 81000 | 110 | 220 | 330 | 27000 | 220 |
7 | 27000 | 110 | 220 | 330 | 9000 | 220 |
6 | 9000 | 110 | 220 | 330 | 3000 | 220 |
5 | 3000 | 110 | 220 | 330 | 1000 | 220 |
4 | 1000 | 110 | 220 | 330 | 330 | 220 |
3 | 330 | 110 | 220 | 330 | 110 | 220 |
2 | 110 | 110 | 220 | 330 | 37 | 330 |
1 | / | / | 220 | 220 | 0 | 220 |
实验步骤:
1.使用前,将所有试剂充分混匀,避免产生气泡。
2.根据实验孔数量,确定所需的板条数目,剩余板条放回含干燥剂的铝箔袋,密封。
3.加样: 每孔加入100μL标准品、样品、阴性对照至相应孔中。用封板膜封板后在室温(18~25℃)下反应1.5h。
4.洗涤: 弃去各孔内液体,用1×PBS-T洗涤液注满微孔(250μL/孔),静置30秒后弃去孔内液体;重复3次,每一次洗板完成后在滤纸上拍干。
5.加生物i素检测抗体工作液: 每孔加生物i素检测抗体工作液100μL,用封板膜封板后室温(18~25℃)下反应45分钟。
6.洗涤: 弃去各孔内液体,用1×PBS-T洗涤液注满微孔(250μL/孔),静置30秒后弃去孔内液体;重复3次,每一次洗板完成后在面巾纸上拍干。
7.加酶结合物工作液: 每孔加酶结合物工作液100μL,用封板膜封板后室温(18~25℃)下反应30分钟。
8.洗涤: 弃去各孔内液体,用1×PBS-T洗涤液注满微孔(250μL/孔),静置2 min后弃去孔内液体;重复3次,每一次洗板完成后在面巾纸上拍干。
9.显色: 每孔分别加底物显色液100μL,轻微振荡混匀后用封板膜封板置25℃避光显色15分钟。
10.测定: 每孔加终止液100μL,轻微混匀。选择酶标仪主波长450nm,测定各孔吸光值(OD值)。
结果分析:
本产品建议采用四参数的拟合方式进行线性拟合及计算。
标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准):
标准品浓度(ng/mL) | O D 值 ( 1 ) | O D 值 ( 2 ) | 平均值 |
27000 | 2.507 | 2.494 | 2.501 |
9000 | 1.73 | 1.733 | 1.732 |
3000 | 1.126 | 1.111 | 0.119 |
1000 | 0.773 | 0.77 | 0.772 |
330 | 0.496 | 0.475 | 0.486 |
110 | 0.289 | 0.285 | 0.287 |
37 | 0.205 | 0.195 | 0.200 |
0 | 0.140 | 0.137 | 0.139 |
以标准品理论浓度与对应OD值进行四参数拟合,得到标准曲线(如下图所示)

注意事项
1. 试剂应按标签说明储存,使用前室温(18-25℃)平衡。
2. 预包被板条使用前,请平衡至室温再打开外包装袋,实验中不用的板条应立即放回包装中密闭封口, 4℃可保存一个月。其余不用试剂应包装好或盖好。
3. 标准品、生物i素及酶结合物体积量很小,使用前请短暂离心,以使管壁或管盖的液体沉积到管底。
4. 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5. 使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6. 洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。
7. 底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8. 本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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