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CCK-8试剂盒进行细胞增殖检测的步骤是怎样的?

更新时间:2023-11-30点击次数:712

CCK-8试剂盒是一种基于WST-8的试剂盒,用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测等,具有使用方便,检测快速,灵敏度高,重复性优于MTT法,毒性小,适合于高通量药物筛选等大规模实验应用的优点。以下是使用CCK-8试剂盒进行细胞增殖检测的步骤:

一、细胞增殖分析

1.培养细胞并将其接种到96孔板中。

2.在37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养24小时。

3.配制不同浓度梯度的样本溶液,如300、100、33.3、11.1、3.7、1.2、0.4、0.14uM。

4.每个浓度三个复孔加入到96孔板中,在37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养适当时间长度。如6,12,24或48小时。

5.在CCK-8试剂盒中加入10μL的CCK-8溶液。

6.在37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养0.5-4小时。

7.用酶标仪在450 nm处测量吸光度。

8.用Excel及Graphpad Prism处理并分析结果。

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二、细胞毒性分析

1. 制备细胞悬液:细胞计数

2. 接种到96孔板中:根据合适的铺板细胞数,每孔约100ul细胞悬液,同样的样本可做3个重复。

3. 37℃培养箱中培养:细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时,如果不需要贴壁,这步可以省去。

4. 加入不同浓度的毒性物质

5. 37℃培养箱中培养:加入毒性物质的培养时间,要看毒性物质的性质和细胞的敏感性,一般要根据细胞周期来决定,起码要一代以上的时间。

6. 加入10ulCCK8:由于每孔加入CCK8量比较少,有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差,建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。

7. 培养1-4小时:细胞种类不同,形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话,可以继续培养,以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少,需要较长的显色时间(5-6小时)。

8. 测定450nm吸光度:建议采用双波长进行测定,检测波长450-490nm,参比波长600-650nm。


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