酶联免疫吸附测定ELISA实验类型有哪些？

酶联免疫吸附测定ELISA实验类型有哪些？有三种必需的试剂：已知的抗原或抗体（用于结合到固相载体上）；酶标的抗体或抗原（标记物）；显色剂（用于显色）。

常见的ELISA实验有四种：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA和竞争ELISA。

直接ELISA法是将样品中的抗原或抗体以非特异性方式直接吸附在包被板上，然后将特异性测定抗体或抗原加入到孔中，洗涤后加入底物显色。相较于其它类型的ELISA实验，直接ELISA实验步骤少，检测速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反应，测定结果不容易出错。但是由于直接ELISA的抗原不是特异性固定的，样本中的所有蛋白质（靶蛋白及其他杂质蛋白）都会与ELISA板结合，实验背景会比较高。而且直接ELISA每种靶蛋白都需要准备能够与其特异性结合的一抗，实验不太灵活。另外由于没有使用二抗，信号没有被放大，降低了测定的灵敏度。一般对抗原的免疫反应进行分析时，常会使用直接ELISA。

间接ELISA法主要用于抗体的检测，先将抗原结合到ELISA板上，随后分两步进行检测：首先加入检测抗体与抗原特异性结合，随后加入酶标二抗检测并利用底物显色。与直接ELISA相比，间接ELISA用到酶标二抗，具有更高的灵敏度，也需要更少的标记抗体，更经济。间接ELISA还提供了更大的灵活性，因为不同的一抗能够与单一标记的二抗一同使用。间接ELISA实验的缺点是存在交叉反应的可能性（酶标二抗直接与抗原结合），可能会增加背景，同时与直接ELISA相比，间接ELISA实验多了二抗孵育的步骤，实验周期增长。间接ELISA法适合测定样品中总抗体的浓度。

夹心ELISA实验需要用到配对抗体（捕获抗体和检测抗体），其实验原理是将捕获抗体结合到ELISA板上，通过捕获抗体固定抗原，随后通过直接ELISA或间接ELISA的方式进行检测。在夹心ELISA实验中，最重要的是对配对抗体进行验证，确保配对抗体能同时与抗原结合，以确保实验的顺利进行。

竞争ELISA，先将特异性抗体包被于固相载体表面，经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液，另一组只加酶标记抗原，经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为所要测定的未知抗原的量。此方法测定的抗原只要有一个结合部位即可，对小分子抗原如激素和药物类的测定常用此法。优点是快，缺点是需要较多量的酶标记抗原。在竞争ELISA实验中，样品中的抗原或抗体竞争性的结合特定数量的酶标抗体或抗原。样品中抗原浓度越高，输出信号越弱，信号输出与样品中抗原的量成反比。

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