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酶联免疫吸附测定ELISA实验类型有哪些?

更新时间:2023-11-17点击次数:730

酶联免疫吸附测定ELISA实验类型有哪些?有三种必需的试剂:已知的抗原或抗体(用于结合到固相载体上);酶标的抗体或抗原(标记物);显色剂(用于显色)。

常见的ELISA实验有四种:直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA和竞争ELISA。

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1

直接ELISA (Direct ELISA)


直接ELISA法是将样品中的抗原或抗体以非特异性方式直接吸附在包被板上,然后将特异性测定抗体或抗原加入到孔中,洗涤后加入底物显色。相较于其它类型的ELISA实验,直接ELISA实验步骤少,检测速度快,不需要用到二抗,避免了交叉反应,测定结果不容易出错。但是由于直接ELISA的抗原不是特异性固定的,样本中的所有蛋白质(靶蛋白及其他杂质蛋白)都会与ELISA板结合,实验背景会比较高。而且直接ELISA每种靶蛋白都需要准备能够与其特异性结合的一抗,实验不太灵活。另外由于没有使用二抗,信号没有被放大,降低了测定的灵敏度。一般对抗原的免疫反应进行分析时,常会使用直接ELISA。



2

间接ELISA (Indirect ELISA)


间接ELISA法主要用于抗体的检测,先将抗原结合到ELISA板上,随后分两步进行检测:首先加入检测抗体与抗原特异性结合,随后加入酶标二抗检测并利用底物显色。与直接ELISA相比,间接ELISA用到酶标二抗,具有更高的灵敏度,也需要更少的标记抗体,更经济。间接ELISA还提供了更大的灵活性,因为不同的一抗能够与单一标记的二抗一同使用。间接ELISA实验的缺点是存在交叉反应的可能性(酶标二抗直接与抗原结合),可能会增加背景,同时与直接ELISA相比,间接ELISA实验多了二抗孵育的步骤,实验周期增长。间接ELISA法适合测定样品中总抗体的浓度。



3

夹心ELISA (Sandwich ELISA)


夹心ELISA实验需要用到配对抗体(捕获抗体和检测抗体),其实验原理是将捕获抗体结合到ELISA板上,通过捕获抗体固定抗原,随后通过直接ELISA或间接ELISA的方式进行检测。在夹心ELISA实验中,最重要的是对配对抗体进行验证,确保配对抗体能同时与抗原结合,以确保实验的顺利进行。



4

竞争ELISA (Competition ELISA)


竞争ELISA,先将特异性抗体包被于固相载体表面,经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,另一组只加酶标记抗原,经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。此方法测定的抗原只要有一个结合部位即可,对小分子抗原如激素和药物类的测定常用此法。优点是快,缺点是需要较多量的酶标记抗原。在竞争ELISA实验中,样品中的抗原或抗体竞争性的结合特定数量的酶标抗体或抗原。样品中抗原浓度越高,输出信号越弱,信号输出与样品中抗原的量成反比。

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