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ELISA实验的具体步骤

更新时间:2023-11-13点击次数:828

酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。ELISA是分子生物学、免疫学和细胞生物学研究中常用到的实验操作之一,一起来了解一下ELISA实验的具体步骤吧!

1. 涂覆:将待检测的抗原或抗体溶液加入到微孔板(通常是96孔板)中,并在孔板表面上形成一层固定的抗原或抗体。这个过程被称为涂覆。

2. 阻断:为了防止非特异性结合,需要在涂覆后加入一种阻断剂,例如牛血清蛋白(BSA)或牛奶粉,以覆盖孔板上未被固定的表面。阻断剂可以减少非特异性结合和降低背景信号。

3. 样品加入:将待测样品加入到微孔板中,样品中的目标抗原或抗体与固定在孔板上的抗体或抗原相互作用。

4. 洗涤:通过反复洗涤孔板,去除未结合的物质,以减少背景信号。

5. 探针加入:加入与待测物体特异性结合的酶标记二抗(例如辣根过氧化物酶-HRP)或酶标记抗原,使其与样品中的目标物体结合。

6. 洗涤:再次洗涤孔板,去除未结合的酶标记物。

7. 底物加入:加入一种底物,其与酶标记物相互作用,产生可测量的信号。常用的底物是一种可被酶催化产生颜色或荧光的物质。

8. 反应停止:通过加入一种停止剂,停止底物的反应,阻止信号进一步增加。

9. 信号测量:使用光谱仪或荧光测量仪测量底物反应产生的信号,根据信号的强度来确定样品中目标物体的浓度。

本期内容:ELISA实验的具体步骤

下期内容:ELISA空白背景高的常见原因和处理方法



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