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怎么选择瞬时转染和稳定转染呢?

更新时间:2023-11-13点击次数:560

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转染是将外源性核酸(DNA或RNA)采用各种化学、生物学或物理方法导入细胞,从而实现对细胞基因功能的蛋白质表达研究。生成重组蛋白,或特异性地增强或抑制转染细胞中的基因表达是转染实验的主要目的。因此,转染是一种功能强大的分析工具,可用于基因或基因产物的功能和调控研究,用于生成转基因生物,并可用作基因治疗方法。常规的转染技术主要分为瞬时转染和稳定转染,么选择瞬时转染和稳定转染呢?


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选择瞬时转染还是稳定转染,具体取决于您要开展的实验的时间范围和最终目标。瞬时转染细胞一般在转染后24-96小时收集,常用于研究基因或基因产物的短期表达效应,执行RNA干扰(RNAi)介导的基因沉默,或快速生成小量重组蛋白。相比之下,当需要长期基因表达或转染细胞需在多项实验中使用时,则更多地选择稳定转染。由于将DNA载体整合至染色体中的概率较低,细胞的稳定转染更麻烦、更具挑战性,需要选择性筛选和克隆分离。因此,稳定转染通常用于大规模的蛋白质生产、长期药理学研究、基因治疗或长期基因调控机制研究。

瞬时转染

稳定转染

外源基因保留在细胞核内,不整合到基因组中

外源基因整合到基因组中

外源基因不传给子代,遗传改变是暂时的

外源基因代代相传,遗传改变是长久的

瞬转的质粒不需要带有抗性

稳转质粒一定要带有特定的抗性以便选择性筛选出稳转克隆株

DNA、RNA都可用于瞬转

只有 DNA可用于稳转,RNA 本身不能稳定导入细胞

操作简单,构好质粒经细胞复苏、转染、细胞培养、蛋白纯化等步骤即可得到目的蛋白

需先将构好的质粒线性化,再导入细胞,经过筛选、细胞传代等步骤才能得到稳转细胞系

周期短,快速产生高表达目的蛋白

周期长,需要 2~3 周筛选稳转株,蛋白表达水平低

无法长期生产得到重组蛋白

能够长期稳定生产目的蛋白

实验成本低

实验成本高,得到稳转株后再生产蛋白成本大大降低





































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下期内容:ELISA实验的具体步骤



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