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如何利用PEI转染细胞呢?

更新时间:2023-11-11点击次数:662

转染细胞的方法有很多,这里介绍一种比较经济实用的转染试剂--聚乙烯亚胺(即PEI)。PEI(polyethylenimine)是一种带有高电荷阳离子的多聚物,非常容易结合带负电荷的DNA分子,形成复合物,并转染到贴壁和悬浮细胞中,常用于大规模瞬时转染表达。在HEK293和CHO等细胞中转染效率较高。那么如何利用PEI转染细胞呢?

实验前准备:

PEI (polysciences, Cat#:24765-1),将PEI配置成1ug/ml,用0.2μm滤膜过滤,并分装储存于负80度。

实验步骤(以转染293T为例):

1.在六孔板中铺10万个细胞,在二氧化碳培养箱中孵育过夜。

2.在100ul DMEM中加入2ug目的质粒。如果是10cm皿可以加入5ug质粒。

3.加入10ul PEI,立即混匀。室温孵育10min。

4.然后再补加600ul DMEM培养基。

5.吸掉六孔板中的培养基,然后将700ul混合液慢慢加入到细胞中,轻轻摇晃混匀。

6.在二氧化碳培养箱中孵育3小时,然后加入2ml wan全培养基(DMEM+10%FBS)。

7.培养箱中孵育48小时,进行下一步实验。

本期内容:如何利用PEI转染细胞呢?

下期内容:怎么选择瞬时转染和稳定转染呢?


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