欢迎进入柏莱源(天津)生物科技有限公司网站!
13302035784
技术文章

TECHNICAL ARTICLES

当前位置:首页  -  技术文章  -  细胞实验中为什么要“慢冻快融”呢?

细胞实验中为什么要“慢冻快融”呢?

更新时间:2023-11-11点击次数:701

细胞冻存和复苏是在细胞研究和生物医学领域中常见的实验技术,用于长期保存和重复使用细胞。此步骤是细胞培养中的关键环节,直接影响细胞存活率和活力,关系到后续细胞实验能否按照计划有效地进行。要想做好细胞冻存和复苏,首先请牢记下面这四个字:慢冻快融!慢冻快融!慢冻快融!重要的事情说三遍!

那么细胞实验中为什么要“慢冻快融"呢?

冻存细胞时,细胞内外环境中的水会形成冰晶。如果直接将细胞冻存到 -196℃ 的液氮中,由于冻结过程中胞外溶液中的水先结冰,使胞外溶液不断浓缩,引起细胞电解质升高、渗透压改变、脱水及蛋白质变性等,会导致细胞受到机械性损伤。

在冷冻保存时,细胞外环境中的水会结冰。冷却速度的不同会导致细胞由于渗透脱水而发生不同程度的收缩。细胞外环境的渗透压随着水结成冰晶而不断升高,冷却速度越慢,细胞内水分通过渗透作用移出细胞的时间就越长。因此,非常缓慢的冷却可能会导致细胞因过度脱水而死亡 (A)。而快速冷却 (C) 会导致细胞内形成冰晶,这会导致细胞在复温时死亡。中间冷却速度 (B) 则可以平衡渗透脱水和细胞内结冰形成的风险,通常可以实现细胞存活率的大幅提升。

如果在冻存液中加入保护剂 (如 sigma 二甲基亚砜,DMSO),可使冰点降低,增加细胞渗透压稳定性。减缓慢速降温过程中的脱水皱缩现象,在缓慢冻结时减少冰晶的生成,使细胞免受损伤[1]。

图片

图 1. 不同冷却速度对细胞存活率的影响。


而在复苏时,需要快速升温,在 1-2 min 内融化并稀释,这时细胞内外还来不及形成较大的冰晶,也不会使细胞长时间暴露在高浓度的电解质溶液中,从而避免细胞损伤,提高细胞存活率。

本期内容:细胞实验中为什么要“慢冻快融"呢?

下期内容:蛋白Marker的常见问题解答




2473262194

TEL:13302035784

微信咨询