BlueKit系列细胞残留人白介素15(IL-15)ELISA检测试剂盒采用双抗夹心法,用于定量检测血清、血浆或细胞上清中人IL-15蛋白的含量。柏莱源生物为谱新生物代理商,具体产品价格与技术问题等信息咨询,请联系我们!
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货号: HG-IL015
BlueKit@系列细胞残留人白介素 15(IL-15) ELISA 检测试剂盒采用双抗夹心法,用于定量检测血清、血浆或细胞上清中人1-15 蛋白的含量。将特异性抗人儿-15 单克隆抗体包被在微孔板上,反应孔内加入标准品、待测样本、检测抗体,室温(18~25°C)孵育,洗涤后再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育。洗涤后加入显色液TMB。颜色反应的深浅与目标蛋白浓度成正比。
检测范围:3.91-250pg/mL
灵 敏 度:0.24 pg/mL
精密度:CV%≤10%,RE%≤士15%
96T
适用于血清、血浆、细胞培养上清及其他生物学样本中人儿-15 蛋白含量测定。
组分 | 规格 | 配制 |
包被酶标板(Coated Plate,CP) | 8孔x12条 | 即用型 |
人IL-15标准品(Human IL-15 Standard,S) | 300μLx1管(2500pg/mL) | 用样品稀释液按比例稀释 |
检测抗体(Detect Antibody,DA) | 6mLx1瓶 | 即用型 |
酶结合物(Streptavidin-HRP,SH) | 12mLxl瓶 | 即用型 |
检测缓冲液(Assay Buffer,AB) | 12mLx1瓶 | 即用型 |
样品稀释液(Sample Diluent,SD) | 15mlx1管 | 即用型 |
10x洗液(10x Wash Buffer,WB) | 50mL xl瓶 | 1:9用去离子水稀释 |
显色液(TMB Substrate,TS) | 12mLx1瓶 | 即用型 |
终止液(Stop Solution,SS) | 12mLx1瓶 | 即用型 |
封板膜(Sealer film,SF) | 5张 | 即用型 |
说明书(Instruction For Use,IFU) | 1份 | 即用型 |
备 注:所有组分存储温度均为 2~8℃,有效期12个月。
◆酶标仪
◆去离子水或蒸馏水
◆恒温培养箱
◆全新滤纸
◆微量移液器及吸头
◆涡旋振荡器
试剂配制
1x洗液根据实际用量,取适量10x浓缩洗液用去离子水 10 倍稀释)
标准曲线的制作
人IL-7标准品S5000 pg/mL40uL+360LSD 作为高标准(500pg/mL)。每个稀释试管中加入200μLSD,使用高标准制备 1:1稀释系列。在进行下一步转移之前彻i底混合每个试管。SD 用作零标准(0pg/mL)。
操作步骤
检测之前请将所有的试剂、样本恢复至室温(18~25°C)。
1.准备好所有需要的试剂及工作浓度标准品。
2.将不需要的板条拆卸下来,放回铝箔袋,重新封好封口。
3.每孔加入 50uL检测缓冲液(AB)。
4.加入 50uL 的标准品(S)、样本。保证连续加样,请不要间断。加样过程在 15 分钟内完成。
5.每孔加入50uL检测抗体(DA)。
6.使用封板膜封板。500 转/分钟振荡,室温(18~25°C)孵育1个小时。
7.弃掉孔内液体,每孔加入 300uL洗液洗板,洗涤4次。每次洗板,在吸水纸上拍干。为获得理想的实验性能,必须彻i底移除残留液体。
8.加入 100uL 酶结合物(SH)。
9.使用新的封板膜封板。500 转/分钟振荡,室温(18~25°C)(18-25°C)孵育 30 分钟。
10.重复步骤 7。
11.每孔加入 100μL 显色液,避光室温(18~25°C)孵育 10-15 分钟。
12.每孔加入 100μL 终止液。
13.在 30 分钟之内,酶标板 450nm 波长测定 OD 值,校正波长设定为 570nm 或者 630nm。
结果处理
1. 标准曲线OD处理(见下例,仅为示例,具体以实际测定为准)
标准品浓度(pg/mL) | OD1 | OD2 | 平均值 |
250.00 | 3.1130 | 3.0550 | 3.0840 |
125.00 | 2.1470 | 2.0170 | 2.0820 |
62.50 | 1.2330 | 1.0960 | 1.1645 |
31.25 | 0.6350 | 0.6030 | 0.6190 |
15.63 | 0.3069 | 0.3381 | 0.3225 |
7.81 | 0.1822 | 0.1820 | 0.1821 |
3.91 | 0.1116 | 0.1070 | 0.1093 |
0.00 | 0.0537 | 0.0513 | 0.0525 |
2. 以标准品理论浓度与对应OD值取1og后进行直线拟合,得到标准曲线(如下图所示)
1. 样品首i次检测,建议进行至少3个连续倍数的稀释,以在标准曲线范围内产生至少一个稀释后样品。
2. 试剂按标签说明储存,使用前室温(18-25℃)平衡。
3. 包被酶标板使用前,请平衡至室温(18-25℃)再打开外包装袋,实验中不用的板条立即放回包装中密封,4℃可保存一个月。其余不用试剂应包装好或盖好。
4. 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
5. 使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
6. 洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干,直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。
7. 底物显色液对光敏感,避免长时间暴露于光下,避免与金属接触影响结果。
8. 本产品为一次性使用的试剂盒,请在效期内使用。
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