珍贵细胞支原体怎么去除？

非重要污染细胞建议直接高压灭活丢弃，稀缺建系细胞、贵重保藏细胞，可选用以下 7 种成熟支原体去除方案。

一、清洗 + 离心纯化 + 敏感抗生素联用

步骤：细胞营养驯化→筛选健康细胞群落→反复平衡盐洗涤 + 低速离心，依靠浮力与重量差减少支原体数量；搭配大环内酯、四环素、喹诺酮三类特-效药（支原体无细胞壁，青霉素、万古霉素完-全无效），大幅提升除菌效率。

二、MRA 支原体清除剂处理

使用 MRA（Mycoplasma Removal Agent）终浓度 25μg/mL 全周期培养，连续处理 14 天，常规可彻-底清除细胞内支原体，是商业化常用药剂方案。

三、药物 + 短时加温联合除菌

先用除菌药物预处理细胞，41℃恒温培养箱放置 18h，高温杀灭残留支原体；注意：高温会轻微损伤部分敏感细胞，处理后需逐步恢复培养条件。

四、专用支原体清除培养基轮换处理

每 2～3 天更换新鲜除菌培养基，换液用无菌 PBS 冲洗细胞 1～2 次；细胞密度过高及时分瓶换皿，连续处理 15 天，结束后 PCR 复检，残留支原体可追加 6 天处理周期。

五、5% 兔源支原体免疫血清处理

添加 5% 兔抗支原体特异性血清，依靠抗体抑制支原体增殖，11 天转阴，转阴后细胞连续培养 5 个月无复发，稳定性优异。

六、动物体内接种除菌法

受污染肿瘤细胞接种同种动物皮下 / 腹腔，依托动物自身免疫系统清除支原体，肿瘤细胞在体内正常增殖，一段时间后取出细胞体外复苏培养。

七、巨噬细胞共培养吞噬除菌

提取动物腹腔巨噬细胞并纯化，和污染细胞共培养，巨噬细胞自然吞噬清除支原体，后续通过染色镜检确认除菌效果。

总结

常规珍贵贴壁细胞优先 MRA + 培养基轮换方案，肿瘤细胞可选体内接种法，按需搭配抗生素纯化，处理完成必须复检支原体。

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