台盼蓝染色法——原理、步骤与优缺点详解

台盼蓝染色是细胞实验室中最基础、最-快速的细胞活性检测技术。它简单易行，仅需普通光学显微镜和血球计数板即可完成。

染色原理

台盼蓝（Trypan Blue）是一种偶氮染料，无法穿透结构完整的活细胞细胞膜。当细胞死亡或细胞膜受损时，膜通透性增加，台盼蓝便可进入细胞内部，与解体的DNA结合，使死细胞在显微镜下呈现均匀的蓝色。活细胞则因膜完整性良好而拒绝染料进入，保持无色透明。

标准操作步骤

制备细胞悬液：将待测细胞消化、吹打均匀，制成单细胞悬液。

混合染色：取少量细胞悬液（如90 μL）与等体积的0.4%台盼蓝溶液（如10 μL）混匀。染色时间不宜过长（通常3-5分钟），以免染料对活细胞造成损伤。

充池计数：吸取混合液充入血球计数板的计数池中。

显微镜观察：在低倍镜下观察并计数。分别计数总细胞数和蓝染的死细胞数。

计算活性：细胞活性（%）= （总细胞数 - 蓝染细胞数）/ 总细胞数 × 100%。

技术优势与局限

优势：

简便快捷：从取样到出结果仅需几分钟。

成本极低：试剂廉价，无需特殊仪器。

适用于常规监控：非常适合日常细胞传代、冻存复苏后的快速活性评估。

局限：

干扰因素多：无法区分有核细胞和无核细胞（如红细胞），红细胞同样会被染色干扰计数；细胞碎片和杂质也会吸附染料，导致死细胞数被高估。

准确性有限：对于活性较低的样本或需要精确数据的实验，误差较大。

主观性强：人工计数时，判断标准可能因人而异。

应用建议

台盼蓝染色最-适合用于快速初步判断，例如细胞传代时确认消化后细胞活性是否达标、冻存细胞复苏后粗略评估存活率。当样本中含有较多红细胞或细胞碎片，或需要精确数据（如发表论文）时，建议选择更准确的AO/PI染色法。

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