欢迎进入柏莱源(天津)生物科技有限公司网站!
13302035784
技术文章

TECHNICAL ARTICLES

当前位置:首页  -  技术文章  -  Lipo3000转染细胞的步骤及注意事项

Lipo3000转染细胞的步骤及注意事项

更新时间:2023-11-07点击次数:1743

关于细胞转染,有许多常用的转染试剂。下面简单介绍下Lipo3000转染细胞的步骤及注意事项

实验准备Lipofectamine™ 3000转染试剂Opti-MEM(可以用无血清的培养基代替)

实验步骤

1.接种细胞,使其在转染时达到70–90%汇合度。

注:对于HEK293,6孔板一般铺50万个细胞左右。对于PC9, 24孔板一般铺5-10万个细胞。由于不同细胞,生长状况不太一样,需要根据情况调整。

2.使用Opti-MEM™培养基稀释Lipofectamine™ 3000试剂,充分混匀。

3.使用Opti-MEM™培养基稀释DNA,制备DNA预混液,然后添加P3000™试剂,充分混匀。

4.将上面两步溶液合在一起,混匀并孵育10-15mins。

5.将混匀后的溶液加入到细胞培养基中,并轻轻摇晃培养基,使其均匀。

6.37°C孵育细胞2–4天,然后分析转染细胞。

注意事项:

1.Opti-MEM需要37℃水浴锅预热。

2.转染siRNA至细胞时,在稀释siRNA时不要加入P3000™试剂。

3.关于Lipo3000的用量,比如6孔板推荐用量有两个3.75ul7.5ul,最di看转染效率,zui高看细胞耐受。

4. Opti-MEMLipo3000预混及Opti-MEM、质粒及P3000预混,都不需要各自孵育,而且两者混合后孵育时间最多不要超过15mins

5.转染中和转染后的细胞培养基中最好不要含有双抗。

对于比较好转染的细胞,如HEK293,而且需要大量转染的时候,可以使用PEI进行转染,毕竟Lipo3000比较贵。例如,在做CO-IP实验时,需要10cm皿转染好几种质粒,就可以用PEI进行细胞转染。

2473262194

TEL:13302035784

微信咨询