CryoStor CS10 是即用型、无血清、无动物源成分的冻存液，含10% USP级DMSO，储存条件为2–8°C避光，切勿冷冻。操作本身不复杂，但几个关键节点决定了复苏后的活率。

一、冻存操作：预冷、适应、慢冻

1. 细胞准备。 确保细胞处于对数生长期、活率>90%。离心收集后调整密度至1×10⁶–1×10⁷ cells/mL。

2. 预冷CS10。 CS10 使用前必须冷藏或预冷至2–8°C，不要室温放置后再接触细胞。

3. 重悬与分装。 用预冷的CS10轻轻重悬细胞沉淀，分装至冻存管（每管1–2 mL）。建议在冻存前将细胞悬液置于2–8°C孵育10分钟，让细胞适应冻存液环境。

4. 程序降温。 使用程序降温盒或程控降温仪，以约-1°C/min的速率降至-80°C。24小时后转入液氮长期保存。

二、解冻复苏：快融、快稀释、快离心

1. 37°C水浴，1–2分钟内完成解冻，轻轻摇晃，完-全融化后立即取出，避免过热。

2. 稀释DMSO。 将细胞悬液缓慢加入预热的完-全培养基中（至少10倍体积），轻轻混匀。稀释培养基温度应在20–37°C之间。

3. 离心去除DMSO。 300×g离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬。这一步是缩短DMSO常温毒性暴露的关键，不能省略。

三、几个容易被忽略的细节

CS10不建议自行稀释。若目标细胞对DMSO敏感，直接换用同系列的CS5（5%）或CS2（2%），不要用培养基稀释CS10来“降低浓度"。

冻存密度不宜偏离推荐范围。过低复苏后难以重新长起来，过高则增加冰晶损伤和聚集风险。

全程无菌，尤其是分装和解冻步骤；开瓶前用70%乙醇或异丙醇擦拭外壁。

四、总结

CS10的操作优势在于“即用"，但“预冷CS10、冻存前2–8°C孵育10分钟、解冻后10倍稀释并离心"这三步不做，即用型配方的性能就打折扣。按这个节奏走，冻存环节的变量就只剩下细胞状态本身。

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