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更新时间:2026-04-29
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酵母单杂交(Y1H):检测对象是DNA与蛋白质的结合。它回答的问题是:“这个DNA序列能招募到哪个蛋白(通常是转录因子)?"
酵母双杂交(Y2H):检测对象是蛋白质与蛋白质的互作。它回答的问题是:“蛋白A能和蛋白B直接结合吗?"
对比项 | 酵母单杂交(Y1H) | 酵母双杂交(Y2H) |
Bait成分 | 目标DNA序列串联报告基因 | Gal4-BD融合蛋白(Bait蛋白) |
Prey成分 | AD融合待测蛋白(转录因子库) | AD融合蛋白库(Prey蛋白) |
互作层级 | DNA-蛋白结合后重组装AD到报告基因上游 | 两个蛋白结合后重组装BD和AD成功能转录因子 |
典型应用 | 鉴定调控元件的结合蛋白;绘制转录因子-DNA调控网络 | 筛选互作蛋白伴侣;构建蛋白互作网络 |
如果你想找某段启动子DNA上未知的结合蛋白,或者验证一个转录因子是否能与特定DNA基序结合,用Y1H。如果你想验证两个已知蛋白是否存在直接物理互作,或是用诱饵蛋白去“钓"出未知的互作蛋白,用Y2H。
两者在实验流程上也有差别:Y1H常常要构建串联重复的DNA诱饵菌株,Y2H则注重融合蛋白表达和毒性检测。选对体系,事半功倍。
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