【实验手册】细胞复苏标准操作流程（SOP），一篇搞定所有步骤！

在细胞培养实验体系中，细胞复苏是决定细胞活性、实验重复性与后续数据可靠性的关键第-步。冻存细胞能否高效 “复活"，直接影响细胞增殖状态、蛋白表达及功能实验结果。为规范操作、降低污染风险、最-大化提升细胞复苏成活率，特整理这套标准化细胞复苏 SOP，无论实验新手入门，还是资-深研究者规范操作，均可直接参照执行，让细胞复苏一步到位。

实验前准备清单

仪器：37℃恒温水浴锅、离心机、生物安全柜、CO₂培养箱。

耗材：15ml离心管、细胞培养瓶/皿、移液管、记号笔、酒精喷壶。

试剂：完-全培养基（已预热）、75%酒精。

详细操作步骤

预热：实验开始前，将完-全培养基放入37℃水浴锅预热至少30分钟。

取细胞：从液氮罐或-80℃冰箱中迅速取出冻存管。（安全提示：戴防护眼镜，防止冻存管爆炸）。

解冻：立即将冻存管放入37℃水浴锅，轻轻摇动。紧盯管内液体，当还剩一小块冰芯（约2-3mm） 时，迅速取出。整个过程控制在1-2分钟内。

消毒：擦干冻存管，用75%酒精全面喷洒，转移至生物安全柜。

稀释：用1ml预热培养基重悬细胞，并转移至含有5-10ml预热培养基的离心管中，轻柔混匀。

离心：室温，1000 rpm（约200-300g），离心3-5分钟。

重悬：小心弃去上清，加入1-2ml新鲜预热培养基，轻轻吹打重悬细胞。

接种：将细胞悬液接种至培养瓶，补足培养基，十字摇晃混匀。

培养：放入37℃、5% CO₂培养箱静置培养，24小时内勿移动。

严格遵循以上标准化操作，可最-大程度减少温度骤变、操作污染、离心损伤等常见问题，让冻存细胞稳定复苏、快速恢复生长状态，为后续传代、诱导、转染、功能验证等一系列实验打下坚实基础。建议将本 SOP 收藏备用、张贴于实验操作台旁，用标准化操作，保障每一次细胞实验稳定、高效、可重复。

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