当发现细胞被细菌污染后,可以尝试以下处理方法:
1. 革兰氏染色法
① 操作过程:首先,制作细胞涂片,自然干燥后,通过火焰固定。然后用结晶紫初染 1 - 2 分钟,水洗后加碘液媒染 1 分钟,再用 95% 乙醇脱色约 30 秒(具体时间可根据涂片的实际情况调整),最后用番红复染 1 - 2 分钟。水洗、干燥后在显微镜下观察。
② 判断依据:如果细菌被染成紫色,为革兰氏阳性菌;如果被染成红色,则为革兰氏阴性菌。这一步很关键,因为不同类型的细菌对不同抗生素的敏感性不同,革兰氏染色可以为后续选择合适的抗生素提供参考。
1. 选择抗生素
① 针对革兰氏阳性菌:可以选择青霉素、链霉素、红霉素等。例如,青霉素能够抑制细菌细胞壁的合成,对革兰氏阳性菌有较好的抗菌效果。使用浓度一般为 10 - 100 U/mL(青霉素)、10 - 100μg/mL(链霉素)、0.3 - 3μg/mL(红霉素),具体浓度可以根据抗生素的说明书和细胞对药物的耐受性进行调整。
② 针对革兰氏阴性菌:常用庆大霉素、卡那霉素、氯霉素等。庆大霉素能与细菌核糖体 30S 亚基结合,阻断细菌蛋白质合成,对革兰氏阴性菌抗菌活性较强。使用浓度通常为 10 - 100μg/mL(庆大霉素)、10 - 100μg/mL(卡那霉素)、10 - 100μg/mL(氯霉素)。
2. 处理步骤
① 配制含抗生素的培养基:将选择好的抗生素加入到新鲜的细胞培养基中,充分混匀。需要注意的是,抗生素的加入可能会对细胞本身产生一定的影响,所以要尽量选择对细胞毒性较小的抗生素,并通过预实验确定合适的浓度。
② 更换培养基并培养细胞:小心地弃去被污染的培养基,用 PBS 缓冲液轻轻洗涤细胞 1 - 2 次,以去除部分细菌和残留的污染培养基。然后加入含抗生素的新鲜培养基,将细胞放回培养箱继续培养。在培养过程中,要密切观察细胞的状态,如细胞的形态、生长速度等。
1. 多次洗涤和换液
① 除了使用抗生素处理外,还可以通过多次用无菌的 PBS 缓冲液洗涤细胞来减少细菌数量。一般可以进行 3 - 5 次洗涤,每次洗涤后更换新的含抗生素培养基。这样可以逐渐清除细菌及其代谢产物,减轻对细胞的不良影响。
2. 联合使用抗生素和其他方法
① 例如,在使用抗生素的同时,可以适当降低培养温度。因为有些细菌在较低温度下生长速度会减慢,而细胞在一定程度上能够耐受较低的温度。如将培养温度从 37℃降低到 30℃ - 32℃,持续一段时间,配合抗生素处理,可能会更有效地清除细菌。
1. 复苏
① 当细胞在含抗生素的培养基中培养一段时间后,细菌污染得到控制,细胞状态逐渐恢复正常。此时,可以将细胞消化下来,用正常的培养基(不含抗生素)进行稀释,然后接种到新的培养瓶中。
2. 验证无污染
① 在细胞复苏并培养几代后,要通过多种方法验证细胞是否真正清除了细菌污染。可以再次进行显微镜观察,确保没有细菌存在;也可以使用一些快速检测试剂盒进行检测,如细菌培养检测试剂盒,将细胞培养上清液接种到特定的细菌培养基中,观察是否有细菌生长,以确认细胞已经wan全恢复正常。
不过需要注意的是,细胞被细菌污染后,成功挽救的概率相对较低,为了确保实验结果的准确性,一般建议如果细胞被细菌污染严重,最好重新获取细胞进行培养。